魚類養(yǎng)殖密度與脅迫相關基因表達的研究.pdf

1、本研究利用半定量RT-PCR法研究了不同養(yǎng)殖密度下錦鯉養(yǎng)殖密度相關基因的組織特異性、時效性表達，并且利用LC-MS分析了不同養(yǎng)殖密度下及高密度脅迫條件下魚體內血清皮質醇的應激表達情況，旨在發(fā)現(xiàn)密度脅迫下抗逆基因的表達規(guī)律，綜合應激的血液激素水平，獲得養(yǎng)殖密度脅迫下基于分子生物學的分子指標。
　　 對密度脅迫相關基因hsp70，hsp90基因在錦鯉四種不同的養(yǎng)殖密度下的mRNA的表達情況作了分析探討。在密度脅迫條件下，五種組織的h

2、sp70 mRNA表達量總體上與養(yǎng)殖密度呈正相關，養(yǎng)殖密度對錦鯉的各組織都能造成一定程度上的脅迫效應，基因表達具有密度依賴性。肌肉和肝臟在密度脅迫超過一定的限度后，表達量出現(xiàn)顯著變化，而且呈現(xiàn)積累現(xiàn)象，是確定合理養(yǎng)殖密度的理想生物指標，hsp70是一個理想的養(yǎng)殖密度脅迫指示基因。
　　 Hsp90 mRNA在養(yǎng)殖密度脅迫下，各組織的表達基本上維持在一個相對較低的水平，15d和45d同時出現(xiàn)了hsp90 mRNA表達量增加的現(xiàn)象，

3、但具有組織特異性表達差異。利用血液、肌肉、腦組織hsp90 在高峰表達期內的變化情況可以用作指示養(yǎng)殖密度對養(yǎng)殖個體的影響。Hsp90 可以作為在高效表達期內的養(yǎng)殖密度脅迫生物指標。
　　 MT mRNA在錦鯉各組織中組成型表達。高密度脅迫組的血液，肌肉，肝臟，腦組織在45d和75d都出現(xiàn)了表達的高峰值。血液、肌肉組織對密度脅迫作用下MT mRNA表達反應較其他三個組織明顯，具有密度依賴性特點。隨著養(yǎng)殖密度的不斷增高，MT mRN

4、A的表達量也隨密度提高而增加，檢測高密度脅迫下血液、肌肉組織的MT mRNA的表達情況可以初步判斷養(yǎng)殖魚類所受到養(yǎng)殖密度的脅迫程度。
　　 血清皮質醇與hsp70、hsp90、MT的表達具有一定的關系，高密度脅迫條件下，hsp70 mRNA在45d，75d基因的表達量最高，hsp90 mRNA在15d，45d達到最高，而MT mRNA的表達量也在45d和75d達到最高峰，與之相關的血清皮質醇激素48h，45d到達了兩個表達的高峰

5、值。45d脅迫基因的表達量與血清皮質醇的表達量呈正相關。75d血清皮質醇的表達量下降，hsp70，MT的表達量維持相對較高的表達水平，呈負相關的規(guī)律，而hsp90的表達量則明顯下降，與皮質激素的表達呈正相關性。
　　 利用脅迫相關基因hsp70，hsp90，MT的表達在一定程度上可以反映養(yǎng)殖密度對養(yǎng)殖魚體的應激程度，結合血清皮質激素的表達情況，綜合養(yǎng)殖魚類的行為學、生長指標，可以建立基于養(yǎng)殖密度下魚體應激的檢測方法，從細胞脅迫水