鲆鰈魚類變態(tài)時期相關(guān)基因的克隆與分析.pdf

1、鲆鰈魚類與其他硬骨魚類最明顯的區(qū)別是脊椎的不對稱性：兩個眼睛都位于身體的一側(cè)(有眼側(cè))。這一脊椎的不對稱性的變化發(fā)生在鲆鰈魚類的變態(tài)時期。變態(tài)時，鲆鰈魚類的一只眼睛從一側(cè)偏轉(zhuǎn)到另一側(cè)，由脊椎對稱的浮游性魚類發(fā)育成脊椎不對稱的底棲型魚類，同時也發(fā)生了很多其他形態(tài)學(xué)和生理學(xué)變化。但是，導(dǎo)致鲆鰈魚類變態(tài)及眼睛偏轉(zhuǎn)方向的分子機制一直沒有定論。 左偏的牙鲆與右偏石鰈的雜交子代基于相同的遺傳背景且在變態(tài)時眼睛向不同方向偏轉(zhuǎn)，成為了研究鲆鰈魚

2、類變態(tài)和眼睛偏轉(zhuǎn)方向的難得的實驗材料。本實驗運用了差異顯示技術(shù)(DDRT-PCR)和代表性差異雜交(RDA)兩種基因篩選方法用來篩選變態(tài)前期的左偏和右偏雜交種中差異表達的基因，分別篩選出23和47個片段。實驗結(jié)果顯示RDA是基因篩選的可行方法之一。大部分的片段與眼睛偏轉(zhuǎn)方向都沒有直接關(guān)系，但是RDA篩選出的肌肉型肌酸激酶1(CK-M1)和胰蛋白酶原前體2(TR2P)經(jīng)檢驗與鲆鰈魚類的變態(tài)有關(guān)。 肌肉型肌酸激酶1作為催化能量產(chǎn)生的

3、重要催化劑之一，從變態(tài)前與變態(tài)前期的牙鲆仔魚的RDA實驗中篩選出經(jīng)克隆測序，得到全序列。其序列與其他魚類和哺乳動物的CK-M1的相似性很高。在牙鲆成魚中，CK-M1在各個組織中都有較高的表達，特別是肌肉，內(nèi)臟和鰓中。整體原位雜交和實時定量PCR結(jié)果顯示CK-M1在變態(tài)期間的牙鲆仔魚中的表達情況與變態(tài)緊密相關(guān)，隨著變態(tài)的開始增加到高峰，之后下降，變態(tài)結(jié)束后，其表達量也下降到與變態(tài)前一樣的水平。這些可以說明，CK-M1與牙鲆仔魚的變態(tài)過程有

4、著密切的關(guān)系。 胰蛋白酶原前體2是動物消化道中由胰腺細胞分泌的重要的消化酶之一。從牙鲆與石鰈雜交種的RDA實驗中篩選出經(jīng)分別在牙鲆和石鰈中克隆測序，分別得到全序列。其序列與其他魚類的。TR2P的相似性較高。在牙鲆成魚中，F(xiàn)R2P在各個組織中都有表達，在腸道中的表達量最高。實時定量PCR結(jié)果顯示TR2P在變態(tài)期間的牙鲆仔魚中的表達情況與變態(tài)緊密相關(guān)，隨著變態(tài)的開始突增，之后稍有下降，但一直維持高于變態(tài)前仔魚的表達量直到變態(tài)完畢。可