低溫脅迫下與茶樹糖代謝相關(guān)基因的克隆與表達.pdf

1、植物在經(jīng)歷低溫馴化時，為了提高其抗寒能力，體內(nèi)常常積累大量的可溶性糖?！安柁r(nóng)98”品種樹型介于灌木與小喬木之間，屬于中葉偏大類，樹姿直立，分枝上斜，葉形長橢圓，葉尖銳尖，葉色黃綠?！坝逼贩N屬于小喬木型中葉類，植株較高大，樹姿直立，分枝密度中等，葉片橢圓形，芽葉黃綠色。
　　 本實驗以這兩種茶樹品種為實驗材料，選取了低溫下茶樹糖代謝相關(guān)的蔗糖磷酸合成酶(CsSPS)、海藻糖-6-磷酸合成酶(CsTPS)和a-葡萄糖苷酶(Csa

2、-Glucosidase)這三個關(guān)鍵基因為研究對象。利用實時熒光定量PCR技術(shù)，測定了茶樹不同器官間、低溫脅迫處理不同時間段及不同部位問基因的表達水平，以此來研究低溫對茶樹糖代謝調(diào)控的分子機制，為進一步揭示茶樹的抗寒機制提供新的研究思路。同時，利用RACE技術(shù)對茶樹CsTPS和Csa-Glucosidase進行了全長克隆及生物信息學(xué)分析，以期發(fā)現(xiàn)這兩種基因在茶樹中同在其它物種中的聯(lián)系及區(qū)別，為解釋基因功能提供一定的理論依據(jù)。
　　

3、 研究發(fā)現(xiàn)茶樹中與糖代謝相關(guān)的這三個基因在不同器官中均呈現(xiàn)出差異性表達，其中CsSPS和CsTPS在受低溫脅迫時，“茶農(nóng)98”和“迎霜”兩個品種中的不同部位間表現(xiàn)出一致的變化趨勢，表達量均在12h最大，只是CsSPS的上調(diào)時間早于CsTPS。但是，Csa-Glucosidase在受低溫脅迫時，只是在“迎霜”品種中的不同部位表現(xiàn)出上調(diào)，而在“茶農(nóng)98”品種中一直是下調(diào)的。
　　 另外，克隆出3125bp的CsTPS的cDNA全長

4、序列，編碼932個氨基酸，具有TPS和TPP兩個保守的結(jié)構(gòu)域，缺乏磷酸盒，屬于TPSⅡ亞家族?？寺〕?915bp的Csa-Glucosidase的cDNA全長序列，編碼924個氨基酸，具有Glycohydro31的保守結(jié)構(gòu)域，儀含有Asp(224)的序列基元，屬于a-GlucosidaseⅡ型。這兩個基因均與被子植物門雙子葉植物綱植物親緣關(guān)系較近。
　　 綜合以上實驗結(jié)果可知，CsSPS和CsTPS比Csa-Glucosidas