小鼠T調(diào)節(jié)細胞“默認性”生成的機制及其運用.pdf

1、目的：調(diào)節(jié)性T細胞（Treg細胞）在維持自身免疫耐受和體內(nèi)免疫平衡中起到非常重要的作用。先前已經(jīng)報道了新生CD4陽性T細胞在T細胞受體（TCR）信號的刺激下具有內(nèi)在“默認性”機制成為調(diào)節(jié)性T細胞。然而，目前“默認性”機制的原理尚不清楚，而且neoTreg細胞對調(diào)節(jié)免疫反應的作用也未清楚，因此將對內(nèi)在“默認性”機制進行探究并延伸運用。
　　方法：由于DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMT）參與Foxp3的調(diào)節(jié)，在Foxp3gfp小鼠中對比檢測了

2、新生鼠及成年鼠在誘導Treg細胞過程中DNMT1和DNMT3b在mRNA和蛋白水平的表達量及蛋白水平的表達活性差異。再通過甲基化檢測技術對neoTreg細胞及成年小鼠誘導Treg細胞的Foxp3基因上的非編碼保守序列-2的甲基化狀態(tài)對比。進一步通過以RAG2-/-（B6）小鼠作為受體接受同種異體(BALB/c)心臟移植并過繼性輸注同基因的CD4陽性效應T細胞建立急性排斥反應模型后，過繼性輸注neoTreg細胞對其抑制急性排斥反應及體內(nèi)穩(wěn)

3、定性進行評估。最后通過甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑（5-Aza）在成年小鼠Treg誘導過程中抑制甲基化轉(zhuǎn)移酶的活性生成5-Aza-Treg細胞，并通過上述neoTreg的各項檢測手段檢測5-Aza-Treg細胞的Treg細胞相關生物標志及功能。
　　結(jié)果：通過體外TCR刺激，DNMT1及DNMT3b基因和蛋白的表達量在成熟的CD4陽性T細胞增加了3-5倍，但在新生CD4陽性T細胞中無顯著增加。進一步過繼性輸注neoTreg細胞能顯著延長移植

4、心臟存活時間（平均存活時間[MST]：47天，p<0.001），并能保持接近于天然調(diào)節(jié)性T細胞（nTreg細胞）相似的Foxp3的表達量。與成熟CD4陽性細胞誘導生成的Treg細胞對比，neoTreg細胞在Foxp3基因的保守非編碼DNA序列（CNS）2位點呈低甲基化狀態(tài)。DNMT的拮抗劑5-氮雜-2'-脫氧胞苷（5-氮雜）能在成熟的CD4陽性T細胞中誘導更多的Foxp3表達量。過繼性輸注5-氮雜誘導生成的Treg細胞聯(lián)合連續(xù)5-氮雜治