基于膽堿能抗炎通路的艾灸治療實(shí)驗(yàn)性RA作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　本研究依據(jù)“艾灸治療RA抗炎效應(yīng)明確，膽堿能抗炎通路對(duì)全身和局部炎癥均具有明顯的抑制作用”的基本事實(shí)，以針灸理論為指導(dǎo)，艾灸家兔“腎俞”、“足三里”治療實(shí)驗(yàn)性RA，圍繞滑膜炎癥關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)，選擇膽堿能抗炎通路作為研究切入點(diǎn)，以“艾灸刺激—膽堿能抗炎通路—抗炎效應(yīng)”為研究主線，運(yùn)用神經(jīng)阻斷、免疫組化、實(shí)時(shí)熒光定量 PCR等方法技術(shù)，探索膽堿能抗炎通路在艾灸治療RA抗炎效應(yīng)中的作用機(jī)制，對(duì)于深化艾灸治療RA的原理研究、豐富

2、灸法的科學(xué)內(nèi)涵具有重要的價(jià)值和意義。
　　方法：
　　將日本大耳白兔隨機(jī)分為正常對(duì)照組、RA模型組、艾灸治療組、艾灸治療迷走神經(jīng)切斷組、艾灸治療假手術(shù)組，用福氏完全佐劑塑造RA疾病模型,運(yùn)用頸部左側(cè)迷走神經(jīng)干切斷術(shù)作為干預(yù)手段，艾灸“腎俞”、“足三里”治療。1.觀察RA家兔的整體狀況、體重、膝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)、滑膜組織炎癥病理形態(tài)；2.采用Elisa法檢測(cè)滑膜液中TNF-α、IL-1、IL-6、HMGB1含量；3.采用Elisa法檢

3、測(cè)血清中α7nAChR和ChAT的含量；分別采用免疫組化法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)滑膜組織中α7nAChR、ChAT的蛋白表達(dá)和mRNA表達(dá)。4.采用免疫組化法檢測(cè)滑膜組織中NF-κBp65、NF-κBp50、IκBα、p-IκBα、IKKβ的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.艾灸家兔“腎俞”、“足三里”可以明顯改善 RA家兔全身狀況、膝關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)滑膜炎癥病理變化，而在切斷迷走神經(jīng)的情況下其作用顯著降低。
　　2.滑膜

4、液中細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果顯示：模型組與正常對(duì)照組相比較，RA模型組關(guān)節(jié)滑膜液中TNFα、IL-1、IL-6、HMGB1含量顯著增高(P<0.01)；與RA模型組比較，艾灸治療組、艾灸治療假手術(shù)組關(guān)節(jié)滑膜液中 TNFα、IL-1、IL-6、HMGB1含量顯著降低(P<0.01)，而艾灸治療迷走神經(jīng)切斷組無(wú)明顯降低（(P>0.05）；與艾灸治療組比較，艾灸治療迷走神經(jīng)切斷組滑膜液中TNFα、IL-1、IL-6、HMGB1含量顯著增高(P<0.0

5、1)，但艾灸治療假手術(shù)組無(wú)明顯增高(P>0.05)。
　　3.α7nAChR、ChAT表達(dá)結(jié)果顯示：模型組與正常對(duì)照組相比較，模型組血清中α7nAChR、ChAT含量、滑膜組織中α7nAChR、ChAT蛋白表達(dá)和 mRNA表達(dá)均顯著降低(P<0.01)；與模型組比較，艾灸組和假手術(shù)組血清中α7nAChR、ChAT含量、滑膜組織中α7nAChR、ChAT蛋白表達(dá)和 mRNA表達(dá)均顯著增高(P<0.01)，而艾灸治療迷走神經(jīng)切斷組無(wú)明

6、顯增高(P>0.05)；與艾灸組比較，艾灸治療迷走神經(jīng)切斷組血清中α7nAChR、ChAT含量、滑膜組織中α7nAChR、ChAT蛋白表達(dá)和mRNA表達(dá)均顯著降低(P<0.01)，但假手術(shù)組無(wú)明顯降低(P>0.05)。
　　4.①NF-κBp65、NF-κBp50、p-IκBα、IKKβ表達(dá)結(jié)果顯示：模型組與正常對(duì)照組相比較，模型組滑膜組織中 NF-κBp65、NF-κBp50、p-IκBα、IKKβ的表達(dá)顯著增高(P<0.01)

7、；與模型組比較，艾灸組和假手術(shù)組滑膜組織中 NF-κBp65、NF-κBp50、p-IκBα、IKKβ的表達(dá)顯著降低(P<0.01)，而艾灸治療迷走神經(jīng)切斷組無(wú)明顯降低(P>0.05)；與艾灸組比較，艾灸治療迷走神經(jīng)切斷組滑膜組織中NF-κBp65、NF-κBp50、p-IκBα、IKKβ的表達(dá)顯著增高(P<0.01)，但假手術(shù)組無(wú)明顯增高(P>0.05)。
　?、?IκBα表達(dá)結(jié)果顯示：模型組與正常對(duì)照組相比較，模型組滑膜組織中

8、IκBα的表達(dá)顯著降低(P<0.01)；與模型組比較，艾灸組和假手術(shù)組滑膜組織中IκBα的表達(dá)顯著增高(P<0.01)，而艾灸治療迷走神經(jīng)切斷組無(wú)明顯增高(P>0.05)；與艾灸組比較，艾灸治療迷走神經(jīng)切斷組滑膜組織中 IκBα的表達(dá)顯著降低(P<0.01)，但假手術(shù)組無(wú)明顯降低(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.艾灸家兔“腎俞”、“足三里”可以明顯改善實(shí)驗(yàn)性RA家兔全身狀況、膝關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)滑膜炎癥病理變化，表明艾灸具

9、有明確的抗炎消腫、抑制滑膜炎癥作用，而在切斷迷走神經(jīng)的情況下其抗炎作用顯著降低，提示艾灸治療RA的抗炎效應(yīng)可能與興奮膽堿能抗炎通路密切相關(guān)。
　　2.艾灸家兔“腎俞”、“足三里”可以抑制實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜液中細(xì)胞因子TNF-α、IL-1、IL-6和HMGB1水平，但在切斷迷走神經(jīng)的情況下其作用顯著下降，提示興奮膽堿能抗炎通路可能是艾灸抑制實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜細(xì)胞分泌促炎細(xì)胞因子的重要機(jī)制之一。
　　3.艾灸家兔“腎俞”、“足三

10、里”可以上調(diào)α7nAChR、ChAT在RA家兔外周血和滑膜組織中的表達(dá)，激活免疫系統(tǒng)的固有膽堿能系統(tǒng)，但在切斷迷走神經(jīng)的情況下其作用顯著降低，提示艾灸可能通過(guò)興奮迷走神經(jīng)釋放 ACh，并與免疫細(xì)胞表面的α7nAChR結(jié)合，從而激活免疫細(xì)胞的固有膽堿能系統(tǒng)，轉(zhuǎn)化為免疫系統(tǒng)內(nèi)彌散的、持續(xù)的免疫調(diào)節(jié)。
　　4.艾灸家兔“腎俞”、“足三里”可以抑制RA家兔滑膜組織中NF-κBp65、NF-κBp50、p-IκBα、IKKβ的蛋白表達(dá)，上調(diào)