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文檔簡介
1、1，3-丙二醇（1，3-propanediol，1，3-PD）是一種重要的化工原料，是新型纖維聚對苯二甲酸丙二醇酯（polytrimethylene terephalate，PTT）的單體，也是用作合成增塑劑、洗滌劑、防腐劑、乳化劑的原料。PTT是一種新型聚酯材料，可用于地毯、織物、紡布、薄膜和熱塑性工程材料等，由于其具有許多優(yōu)良特性和廣闊的應用前景，成為當前的研究熱點。
目前1，3-丙二醇的生產(chǎn)均為化學法生產(chǎn)，近年來，利
2、用葡萄糖或葡萄糖轉化的甘油以及其它可再生資源為原料生產(chǎn)1，3-丙二醇的生物轉化法己成為1，3-丙二醇研究的熱點。本實驗擬采用代謝工程設計的第三條思路，即在大腸桿菌中引入釀酒酵母3-磷酸甘油脫氫酶基因和3-磷酸甘油酯酶基因，使原本不產(chǎn)甘油的大腸桿菌能發(fā)酵葡萄糖生產(chǎn)甘油，并利用λ-Red重組系統(tǒng)來對大腸桿菌甘油激酶（glpK）、甘油脫氫酶（gldA）進行敲除，構建多個基因缺失的基因工程菌，進一步改造大腸桿菌利用葡萄糖生產(chǎn)甘油，使得甘油得到最
3、大量積累，并同時兼與Klebsjella混合發(fā)酵，以提高1，3-PD的產(chǎn)量。
本文利用Red重組系統(tǒng)構建了大腸桿菌JM109甘油激酶基因（glpK）和甘油脫氫酶基因（gldA）缺失的雙突變菌株JM109C，然后將表達釀酒酵母3-磷酸甘油脫氫酶基因（GPD1）和3-磷酸甘油酯酶基因（HOR2）的質粒pSE-gpd1-hor2轉化到JM109C突變菌株中，接種JM1090/pSE-Epd1-hor2和Klebsiella在含1
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