間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)心衰大鼠心肌基質(zhì)金屬蛋白酶-9及抑制因子-1表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景：擴(kuò)張性心肌病是一種重要的心血管病，死亡率很高，有創(chuàng)的機(jī)械循環(huán)輔助和心臟移植是以往治療終末心衰的主要手段。細(xì)胞移植作為一種新的治療方法已開(kāi)始應(yīng)用于心血管疾病，但目前的研究大多集中在改善心肌梗死區(qū)域的心功能和心肌組織的再生上，所使用的移植細(xì)胞包括了骨髓細(xì)胞、內(nèi)皮祖細(xì)胞、心肌細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞等。特別是擁有多向分化潛能和易于擴(kuò)增培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞。心肌病發(fā)生心力衰竭的主要機(jī)制是心肌細(xì)胞大量喪失(死亡和凋亡)和間質(zhì)重塑。骨髓間充質(zhì)干細(xì)

2、胞不僅可以歸巢心衰大鼠心肌組織和分化為心肌細(xì)胞并改善心功能而且可以調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶-9/基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1表達(dá)而影響心肌間質(zhì)纖維重塑。 目的：探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的心衰大鼠心功能及心肌細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9及其抑制因子-1表達(dá)的影響。 方法： 1、取雌性Wister大鼠(n=38)先隨機(jī)選取8只作為正常對(duì)照組，其余30只腹腔注射阿霉素(2.5mg.kg-1，每周一次，連續(xù)6周)建立心衰模

3、型。6周后存活大鼠(n=21)隨機(jī)分為細(xì)胞移植組(n=11)和移植對(duì)照組(n=10)。正常對(duì)照組大鼠腹腔注射等量的生理鹽水。 2、體外分離，純化，增殖骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)并用含有12％胎牛血清的DAEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，流式細(xì)胞儀對(duì)體外培養(yǎng)的MSCs行CD-44表型鑒定。取第三代MSCs進(jìn)行移植，移植前MSCs用5-溴-2’脫氧尿苷(BrdU)進(jìn)行標(biāo)記。 3、末次阿霉素注射后一周，將5×106個(gè)MSCs通過(guò)鼠尾靜脈注射

4、的方法移植到移植組大鼠。心衰對(duì)照組大鼠注射等量培養(yǎng)基，正常組注射等量生理鹽水。移植后4周，采用超聲測(cè)量心功能及心室重塑，心臟切片行病理和免疫組化檢查了解移植細(xì)胞在受體心臟的存活情況及基質(zhì)金屬蛋白酶-9，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1及cx-43表達(dá)情況。 結(jié)果： 體外培養(yǎng)的第三代MSCs流式細(xì)胞儀鑒定結(jié)果顯示：CD44陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占99.7％±0.9％，心衰MSCs移植組心肌組織中可以見(jiàn)5-溴-2’脫氧尿苷標(biāo)記的骨髓間充質(zhì)干細(xì)

5、胞(MSCs)歸巢，心衰細(xì)胞移植組間質(zhì)基質(zhì)金屬蛋白酶陽(yáng)性表達(dá)比心衰對(duì)照組和正常對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)歸巢并表達(dá)細(xì)胞縫隙連接蛋白-43陽(yáng)性。左室射血分?jǐn)?shù)細(xì)胞移植組與心衰對(duì)照組和正常對(duì)照組分別為(87.26±1.64)％，(72.42±2.46)％，和(93.60+1.54)％，(P＜0.05)。細(xì)胞移植組相對(duì)于心衰對(duì)照組左室心功能差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。 結(jié)論：經(jīng)靜脈移植骨髓