燈盞細(xì)辛預(yù)處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注后細(xì)胞凋亡及SOCS-3表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究燈盞細(xì)辛對細(xì)胞凋亡及細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子-3在大鼠局灶性腦缺血再灌注后腦組織中的動(dòng)態(tài)表達(dá)特點(diǎn),從而為中藥防治腦缺血再灌注損傷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:將體重為280g～320g的雄性SD大鼠90只隨機(jī)分為假手術(shù)組(SG),對照組(CG)及實(shí)驗(yàn)組(EG),其中對照組及實(shí)驗(yàn)組再隨機(jī)分為缺血2h再灌注3h、6h、12h、24 h、48h,、72h、7d7個(gè)時(shí)間點(diǎn),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)6只大鼠,其中每組一只用于TTC染色。運(yùn)用改良

2、線栓法制作局灶腦缺血再灌注模型,實(shí)驗(yàn)組術(shù)前兩周每日胃灌注燈盞細(xì)辛注射液20Mg／Kg體重。于再灌注時(shí)判斷其神經(jīng)功能缺損情況,參照longa[1]評分標(biāo)準(zhǔn),表現(xiàn)為1-3分,納入實(shí)驗(yàn)。分別于再灌注后7個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行神經(jīng)功能評分；并分批處死大鼠,斷頭開顱取出腦組織。取缺血區(qū)腦組織,對其進(jìn)行切片,切成4片,其中1片用于干濕重法測定腦組織含水量,1片用于TUNEL法測定凋亡細(xì)胞,1片用于RT-PCR法測定SOCS-3的含量,第4片用來做病理染色。假

3、手術(shù)組右側(cè)大腦半球腦組織處理方法同上。
　　 結(jié)果:(1)行為學(xué)評分比較:假手術(shù)組沒有神經(jīng)功能缺損,EG及CG均有神經(jīng)功能缺損,各時(shí)間點(diǎn)EG與CG比較神經(jīng)功能評分有顯著差異(P<0.05)。(2)腦組織含水量:EG及CG病灶側(cè)與假手術(shù)組比較,腦組織含水量6h開始增加,24 h時(shí)達(dá)高峰；而EG與CG相比,增高幅度較之為低(P<0.05)。(3)病理學(xué)變化:術(shù)后24小時(shí),假手術(shù)組:未見明顯病理性改變；對照(CG)組:缺血區(qū)域組織結(jié)構(gòu)

4、破壞,間隙疏松,細(xì)胞腫脹變形,胞核縮小、消失,炎細(xì)胞浸潤；實(shí)驗(yàn)(E G)組:明顯輕于對照(CG)組。(4)神經(jīng)細(xì)胞凋亡測定:應(yīng)用TUNEL法在光學(xué)顯微鏡下觀察。假手術(shù)組偶見陽性細(xì)胞；對照組及實(shí)驗(yàn)組凋亡細(xì)胞于再灌注后逐漸增加,24小時(shí)達(dá)高峰,以后逐漸減少；實(shí)驗(yàn)組(EG)凋亡區(qū)域分布較C G少,凋亡細(xì)胞數(shù)目也較C G低(P<0.05)。(5)SOCS-3mRNA含量變化:假手術(shù)組:SOCS-3表達(dá)量恒定；C G及E G:SOCS-3表達(dá)在再

5、灌注早期就明顯升高,24h時(shí)達(dá)高峰,隨后表達(dá)逐漸降低,但至再灌注7d時(shí)表達(dá)仍高于假手術(shù)組,而EG與CG比較,其在6h～7d的表達(dá)量較對照組高(P<0.05)。
　　 結(jié)論:(1)使用改良線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注模型操作方便、成功率較高,是研究腦缺血再灌注損傷較為理想的模型。(2)大鼠腦缺血再灌注后可引起腦組織含水量增高和細(xì)胞凋亡,導(dǎo)致神經(jīng)功能損害。(3)大鼠腦缺血再灌注時(shí)SOCS-3的表達(dá)增高,該因子可減輕炎癥反應(yīng)、腦組