淫羊藿總黃酮對小鼠隱睪與隱睪復位后睪丸生精功能的影響.pdf

1、　　目的：通過手術建立小鼠隱睪模型,研究淫羊藿總黃酮對隱睪小鼠的生精功能保護作用,并初步探尋其可能的作用機制；通過對隱睪模型小鼠行隱睪復位固定手術,研究淫羊藿總黃酮對隱睪小鼠行復位固定術后睪丸的生精功能恢復的促進作用,進一步探索其對促進生精功能恢復作用的可能機制。
　　方法：(1)實驗一：將小鼠睪丸提到腹腔并封閉內環(huán)口建立小鼠隱睪模型,將已建立隱睪模型的小鼠隨機分為模型組、淫羊藿總黃酮低、高劑量組,另取假手術的小鼠作為假手術組,

2、于造模手術第2天開始,淫羊藿總黃酮低、高劑量組分別灌服100 mg·kg-1、200 mg·kg-1的淫羊藿總黃酮,假手術組和模型組給予1%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)0.01 mL·g-1灌胃,每天1次,連續(xù)給藥14 d后進行實驗。末次給藥24 h后,稱小鼠體重并記錄,處死小鼠,取睪丸并稱濕重,切取一側睪丸組織經橫軸剪切、固定、包埋,經HE染色和電鏡染色后分別進行睪丸組織顯微、超微病理形態(tài)學分析,并對HE染色的病理切片作Johnse

3、n評分分析,免疫組織化學方法檢測睪丸組織中核增殖抗元(PCNA)的表達情況并作定量分析,剩余部分的睪丸組織通過PCR技術檢測SOD2 mRNA、SITR3 mRNA的表達；另一側睪丸組織勻漿,進行谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)的含量檢測；剪碎附睪于1 mL精子營養(yǎng)液中,檢測精子密度和活率。(2)實驗二：按實驗一方法建立隱睪模型后,將已建立隱睪模型的小鼠隨機分為模型組、淫羊藿總黃酮低、高

4、劑量組,另取假手術的小鼠作為假手術組,常規(guī)飼養(yǎng)14 d后,對模型組及淫羊藿總黃酮低、高劑量組小鼠隱睪行隱睪復位固定手術,術后假手術組和模型組每天灌服1%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)0.01 mL·g-1,淫羊藿總黃酮低、高劑量組分別灌服100 mg·kg-1、200 mg·kg-1淫羊藿總黃酮,每天1次,各組小鼠連續(xù)給藥14 d。于末次給藥24 h后,稱小鼠體重并記錄,處死小鼠,取睪丸和附睪并稱濕重,切取一側睪丸組織經橫軸剪切、固定、

5、包埋制成蠟塊,經HE染色和電鏡染色后分別進行睪丸組織顯微和超微病理形態(tài)學分析,另一側的睪丸組織通過PCR技術進行SCF mRNA、GDNF mRNA的表達分析,另一側睪丸組織進行生精細胞分離,用流式細胞技術檢測睪丸生殖細胞周期。
　　結果：(1)淫羊藿總黃酮能夠增加隱睪小鼠的睪丸重量,提高精子密度與精子活率；改善小鼠睪丸組織的病理學變化,增加小鼠睪丸組織的Johnsen評分；顯著降低睪丸組織中MDA含量,提高SOD和GPX活性,

6、上調SOD2 mRNA、SIRT3 mRNA的表達,調節(jié)氧化-抗氧化系統(tǒng)的平衡。(2)在隱睪模型小鼠復位固定手術后,淫羊藿總黃酮能夠有效恢復睪丸生精小管上皮結構,促進精原干細胞與初級精母細胞進一步分裂成次級精母細胞,并促進次級精母細胞向精子細胞的轉化,恢復各級生精細胞百分比,顯著增加小鼠睪丸中GDNF mRNA、SCF mRNA的表達。
　　結論：(1)淫羊藿總黃酮能減輕隱睪所致的小鼠生精功能損傷,其作用機制可能與上調SIRT3