miRNA-200b及其靶基因IGF-2R在卵巢漿液性腫瘤中的表達(dá)研究.pdf

1、卵巢漿液性腫瘤(ovarian serous tumors)是最常見(jiàn)的婦科腫瘤之一，占卵巢上皮-間質(zhì)腫瘤的46％，其良性腫瘤，交界性腫瘤及惡性腫瘤的比例大約為60％，10％和30％。近年來(lái)，盡管臨床上惡性漿液性卵巢癌的綜合治療已經(jīng)很普遍，但以手術(shù)為主，化療為輔的綜合治療對(duì)卵巢癌的生存率并沒(méi)有顯著提高。miRNA表達(dá)研究過(guò)程中，基因芯片技術(shù)可以有效快捷地比較大量miRNAs表達(dá)變化情況。在芯片檢測(cè)結(jié)果后，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法是驗(yàn)證m

2、iRNA芯片數(shù)據(jù)或檢測(cè)單個(gè)miRNA表達(dá)的高靈敏度的方法。胰島素樣生長(zhǎng)因子受體IGF-2R是miRNA-200家族Target Scan軟件預(yù)測(cè)的常見(jiàn)靶基因，IGF-2R信號(hào)通路參與調(diào)節(jié)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)，目前尚未有研究證實(shí)IGF-2R是miRNA-200家族的靶基因，IGF-2R與miRNA-200家族在卵巢漿液性腺癌中發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)分子機(jī)制仍然需要深入研究。
　　目的:用小RNA高通量測(cè)序技術(shù)篩選卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌組

3、織中差異表達(dá)的microRNAs，實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證其表達(dá)量，探討差異表達(dá)microRNAs在漿液性乳頭狀囊腺癌中的作用機(jī)制;在蛋白水平檢測(cè)miRNA-200家族中的miRNA-200b預(yù)測(cè)靶基因IGF-2R在卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌，交界型漿液性囊腺瘤、漿液性囊腺瘤及正常卵巢的表達(dá)，探討它們的相關(guān)性及與臨床病理特征間的關(guān)系，為發(fā)掘miRNA-200家族作為新一代的惡性漿液性卵巢癌早期診斷的腫瘤分子標(biāo)志物的可行性提供理論基礎(chǔ)。

4、　　方法:(1)取3例惡性卵巢腫瘤（術(shù)中快速及術(shù)后病理檢測(cè)結(jié)果均證實(shí)為卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌）做為腫瘤組，手術(shù)切除3例正常卵巢組織（來(lái)源于子宮肌瘤子宮+雙附件切除標(biāo)本）做為對(duì)照組，采用小RNA高通量測(cè)序平臺(tái)及相關(guān)軟件獲取掃描圖像和對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行分析運(yùn)算，選取在惡性漿液性卵巢腫瘤中表達(dá)較其它miRNA高的miRNA200家族，且與正常卵巢組織中的表達(dá)相比在漿液性卵巢腺癌中明顯過(guò)度表達(dá)的has-miR-200b-3p為進(jìn)一步研究對(duì)象;(2)

5、通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)驗(yàn)證芯片結(jié)果;(3)采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)has-miR-200b-3p靶蛋白胰島素生長(zhǎng)因子2受體(IGF-2R)在86例卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌，卵巢交界型漿液性囊腺瘤、卵巢漿液性囊腺瘤及正常卵巢的表達(dá)，結(jié)合患者的臨床資料統(tǒng)計(jì)分析相關(guān)指標(biāo)之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:(1)所提取的RNA經(jīng)過(guò)質(zhì)量檢測(cè)符合芯片實(shí)驗(yàn)需求;(2)惡性漿液性卵巢腫瘤組和對(duì)照組芯片研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)107個(gè)miRNA差異表達(dá)（其中84個(gè)表達(dá)顯

6、著上調(diào)，23個(gè)表達(dá)顯著下調(diào)）;(3)選取漿液性卵巢癌標(biāo)本中表達(dá)顯著上調(diào)的has-miR-200b-3p進(jìn)行定量研究，其結(jié)果符合芯片分析結(jié)果;(4)免疫組化SP法檢測(cè)IGF-2R蛋白在正常卵巢組織、漿液性囊腺瘤、交界型漿液性囊腺瘤、漿液性乳頭狀囊腺癌中陽(yáng)性表達(dá)率依次減弱，分別為100％、93.3％、86.7％和47.8％。卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌組織與卵巢交界型漿液性囊腺瘤，卵巢漿液性囊腺瘤及正常卵巢組織IGF-2R蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較，均存

7、在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(雙側(cè)P=0.008;P=0.002，P=0.003)，正常卵巢組織和卵巢漿液性囊腺瘤比較沒(méi)有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（雙側(cè)P=0.405，P＞0.05）;IGF2R表達(dá)的陽(yáng)性表達(dá)程度與患者的年齡、病理學(xué)分級(jí)無(wú)顯著差異(P＞0.05)，與不同的臨床分期、腹腔有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和生存狀態(tài)有顯著差異(P均＜0.05）。
　　結(jié)論:卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌中存在差異表達(dá)的miRNA，這些差異表達(dá)的miRNA有可能作為上皮性卵巢癌新的診斷