Dll4靶向納米藥物抗血管生成治療腫瘤的研究.pdf

1、腫瘤血管生成是一個(gè)多因素、多步驟的復(fù)雜病理過(guò)程，以腫瘤血管生成信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子為靶點(diǎn)開發(fā)抗腫瘤藥物是目前藥物研發(fā)的熱點(diǎn)?，F(xiàn)階段已有近十種抑制腫瘤血管生成的分子靶向藥物成功轉(zhuǎn)化應(yīng)用于癌癥的臨床治療。然而，這些分子靶向藥物臨床使用一段時(shí)間后常常出現(xiàn)低響應(yīng)和耐藥的現(xiàn)象，尋找新的抗腫瘤血管生成治療靶點(diǎn)顯得尤為迫切。近年來(lái)，Delta樣配體4（Delta-like ligand4，Dll4）被發(fā)現(xiàn)在腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞中高度表達(dá)，Dll4-N

2、otch信號(hào)通路在腫瘤血管生成中起著非常重要的調(diào)節(jié)作用，包括調(diào)控腫瘤血管的萌芽、分支和影響血流灌注功能等。Dll4在腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的選擇性高表達(dá)提示其是一個(gè)潛在的抗腫瘤血管生成靶向納米藥物的新的遞送靶點(diǎn)。
　　本研究首次構(gòu)建了一種GD16多肽（H2N-GRCTNFHNFIYICFPD-CONH2）修飾的紫杉醇（PTX）納米遞送系統(tǒng)（GD16-PTX-NP），該納米藥物可特異性地靶向內(nèi)皮細(xì)胞表面高表達(dá)的Dll4配體。進(jìn)一步以荷

3、人頭頸癌FaDu（Dll4陰性表達(dá)）腫瘤裸鼠為模型，研究該納米藥物的靶向抗血管生成治療腫瘤的作用和機(jī)制。
　　采用乳化-溶劑揮發(fā)法制備裝載PTX的納米粒（PTX-NP），通過(guò)氨基末端PEG化修飾法將 GD16多肽連接到PTX-NP表面制得GD16多肽修飾的紫杉醇納米粒（GD16-PTX-NP）。透射電鏡（TEM）圖像顯示納米粒表面形態(tài)圓整，大小均一，無(wú)聚集粘附現(xiàn)象。采用Malvern Zetasizer Nano ZS納米粒度儀測(cè)

4、得GD16-PTX-NP的粒徑為189.2 nm，Zeta電位為-14.2 mv。HPLC測(cè)得GD16-PTX-NP的載藥量為3.9％，包封率為35.3%。納米粒在PBS中的釋放表現(xiàn)為先突釋和后緩釋的雙相釋放過(guò)程，在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)中顯示出良好的長(zhǎng)循環(huán)特性。采用高內(nèi)涵藥物篩選技術(shù)考察了人臍靜脈內(nèi)細(xì)胞（HUVEC）對(duì)香豆素6標(biāo)記的納米粒的攝取情況。GD16多肽修飾的納米粒可通過(guò)與HUVEC表面高表達(dá)的Dll4配體特異性結(jié)合促進(jìn)納米粒內(nèi)吞

5、進(jìn)入血管內(nèi)皮細(xì)胞，游離多肽、低溫、菲律賓菌素和氧化苯砷等可顯著抑制內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)納米粒的攝取。GD16多肽的靶向性可顯著增加GD16-PTX-NP對(duì)HUVEC增殖、遷移、小管形成和運(yùn)動(dòng)性的抑制作用。GD16-PTX-NP可有效地抑制裸鼠體內(nèi)Matrigel種植體的微血管密度。采用Xenogen小動(dòng)物成像技術(shù)觀察到DiR標(biāo)記的GD16-NP可在腫瘤組織中靶向性高蓄積，并且該效應(yīng)可被游離GD16多肽阻斷。這一結(jié)果提示GD16多肽修飾可顯著增強(qiáng)納

6、米粒對(duì)腫瘤組織的靶向性。激光共聚焦顯微鏡圖片顯示香豆素6標(biāo)記的GD16-PTX-NP可準(zhǔn)確靶向腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞并進(jìn)一步誘導(dǎo)其凋亡。以荷FaDu腫瘤裸鼠為模型，考察了GD16-PTX-NP體內(nèi)抗血管生成治療腫瘤的活性。GD16-PTX-NP能夠通過(guò)減少腫瘤組織中的微血管密度和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡，有效地延緩腫瘤體積的生長(zhǎng)，并且無(wú)體重減輕等明顯毒副作用。
　　本研究首次構(gòu)建了靶向腫瘤血管Dll4配體的納米藥物（GD16-PTX-NP），