大鼠類風濕性關節(jié)炎模型的建立及血漿激肽釋放酶在其發(fā)病中的作用.pdf

1、第一部分，類風濕性關節(jié)炎大鼠模型的建立和評價
　　 目的：研究建立一種簡便、有效、實用的類風濕性關節(jié)炎大鼠模型，并從多方面進行評價，為類風濕性關節(jié)炎發(fā)病機制及有效治療藥物的深入研究提供可靠的動物模型。
　　 方法：雌性Lewis大鼠，6-8周齡，20只，隨機分為兩組，正常對照組8只，模型組12只。模型組大鼠尾根部皮下注射牛II型膠原和弗氏完全佐劑混合乳劑，誘導Lewis大鼠產(chǎn)生關節(jié)炎。實驗期間，觀察大鼠的一般情況；記錄大

2、鼠體重及踝關節(jié)直徑變化；初次免疫后1周、2周、3周、4周對實驗大鼠進行關節(jié)炎指數(shù)評分；初次免疫、初次免疫后4周、初次免疫后12周對實驗大鼠行X線攝片；初次免疫、初次免疫后2周、3周、4周對實驗大鼠行踝關節(jié)MRI檢查；初次免疫、初次免疫后2周、3周、4周、12周取模型組大鼠踝關節(jié)行組織切片HE染色；初次免疫后3周，實驗大鼠眼眶取血，分離血清，ELISA法檢測血清中TNF-a、IL-1β的水平；初次免疫后11天，實驗大鼠眼眶取血，分離血清，

3、大鼠細胞因子蛋白芯片試劑盒(RatCytokine Array Panel Array Kit)檢測大鼠血清中細胞因子的變化。
　　 結果：正常對照組大鼠生長迅速，踝關節(jié)無腫脹。模型組大鼠生長緩慢，初次免疫后12天模型組大鼠踝關節(jié)陸續(xù)出現(xiàn)紅腫，21天左右關節(jié)腫脹達到高峰，關節(jié)炎指數(shù)評分較正常組明顯升高。踝關節(jié)X線片、MRI及組織病理學檢查均顯示模型組大鼠關節(jié)滑膜組織、軟骨組織及骨組織呈典型的關節(jié)炎病變。ELISA檢測結果顯示模型

4、組大鼠TNF-a、IL-1β水平較正常對照組大鼠明顯升高(P＜0.05)。細胞因子蛋白芯片檢測結果顯示模型組大鼠多種炎癥趨化因子表達增高。
　　 結論：1．牛II型膠原混合完全佐劑免疫Lewis大鼠誘導類風濕性關節(jié)炎的方法可靠、模型穩(wěn)定性好、Lewis大鼠發(fā)病率高。2．膠原誘導的大鼠類風濕性關節(jié)炎模型(CIA)和人類類風濕性關節(jié)炎（RA）的病理特點和臨床特征極其類似，可應用于類風濕性關節(jié)炎發(fā)病機制及抗類風濕性關節(jié)炎藥物療效評價及

5、作用機制的研究。
　　 第二部分,血漿激肽釋放酶在CIA大鼠發(fā)病中的作用
　　 目的:研究血漿激肽釋放酶在CIA大鼠發(fā)病中的作用及其作用機制。
　　 方法:按第一部分所述方法建立CIA大鼠模型，并使用血漿激肽釋放酶的抑制劑EPI-KAL-2、13G11進行干預治療。實驗期間觀察大鼠的一般情況，記錄踝關節(jié)直徑變化；初次免疫后1周、2周、3周、4周對各組大鼠行關節(jié)炎指數(shù)評分；初次免疫后4周，實驗大鼠眼眶取血，ELIS

6、A法檢測血清中炎癥因子TNF-a、IL-1β及補體C3a、C5a的水平。
　　 結果:正常大鼠生長迅速，踝關節(jié)無腫脹，模型組大鼠生長緩慢，踝關節(jié)腫脹明顯，EPI-KAL-2和13G11治療組大鼠踝關節(jié)腫脹程度較模型組明顯減輕。初次免疫后2周、3周、4周時，EPI-KAL-2和13G11治療組大鼠關節(jié)炎指數(shù)評分明顯低于PBS治療組，差異具有統(tǒng)計學意義。ELISA檢測結果顯示PBS治療組和13G11治療組大鼠血清中TNF-a、IL-

7、1β水平均較正常對照組大鼠明顯增高，差異具有統(tǒng)計學意義。13G11治療組大鼠血清TNF-a、IL-1β水平較PBS治療組低，但二者差異無統(tǒng)計學意義。正常對照組、PBS治療組、13G11治療組，三組間C3a水平無明顯差異，13G11治療組C5a水平較PBS治療組明顯降低，兩者間差異具有統(tǒng)計學意義，13G11治療組C5a水平同正常對照組相比無明顯差異。
　　 結論:1．血漿激肽釋放酶的抑制劑EPI-KAL-2、13G11可以明顯抑制