家族性腺瘤性息肉病腺瘤干細胞的研究以及高頻電切對家族性腺瘤性息肉病的治療作用.pdf

1、關(guān)于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移和治療一直是醫(yī)學(xué)研究的熱點。傳統(tǒng)觀點認為，腫瘤由成熟細胞突變而來，是由均一的腫瘤細胞共同增殖構(gòu)成的，所有腫瘤細胞都有無限增殖能力。因此臨床上常以腫瘤體積是否縮小或消失作為衡量腫瘤療效的一個標準.但臨床上許多腫瘤患者，在手術(shù)切除腫瘤或經(jīng)過其他治療，病情已獲穩(wěn)定一段時間后，卻又出現(xiàn)腫瘤的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，不能獲得徹底治愈。 新近研究發(fā)現(xiàn)：腫瘤組織中存在極少量干細胞樣亞群，它具有無限增殖的潛能，在啟動腫瘤形成

2、和生長中起著決定性的作用，而其余的大多數(shù)細胞，經(jīng)過短暫的分化，最終死亡。腫瘤生長是腫瘤組織中極少量具有特殊表面標志的腫瘤干細胞增殖的結(jié)果。這提示腫瘤治療應(yīng)針對在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起決定性作用的腫瘤干細胞，而不是大部分無增殖、分化能力的腫瘤實體細胞。這可能促進腫瘤治療學(xué)發(fā)生革命性改變。 家族性腺瘤性息肉病(familial adenomatous polyposis，F(xiàn)AP)是常見的遺傳性大腸腫瘤之一，約占總大腸腫瘤的1％，可分為經(jīng)

3、典型家族性腺瘤性息肉病(Classical FAP，CFAP)，衰減型家族性腺瘤性息肉病(Attenuated FAP，AFAP)和MYH相關(guān)性息肉病(MYH associatedFAP，MAP)三種，其臨床表現(xiàn)為青春發(fā)育期發(fā)生結(jié)直腸腺瘤，后逐漸增多，甚至滿布所有結(jié)直腸粘膜，如不及時干預(yù)治療，將發(fā)生癌變。 腫瘤干細胞理論提示FAP可能也來源于腺瘤干細胞(Adenomastem cells)。分離、培養(yǎng)、鑒定腺瘤干細胞并研究其性質(zhì)

4、具有重要意義。腫瘤干細胞研究的難點在于確定其特異性表面標志或表面標志的組合方案。應(yīng)用有針對性的抗原去檢測細胞亞群的表面標志將節(jié)省大量的時間和研究經(jīng)費，并有望形成高效的分選方案。 我們通過一種新的干細胞標記物微管相關(guān)蛋白DCAMKL-1來鑒定FAP腺瘤干細胞，并通過研究干細胞中某些蛋白的表達，研究腺瘤發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)歸的機制。 第一章家族性腺瘤性息肉病腺瘤干細胞的鑒定、分離、培養(yǎng)以及相關(guān)蛋白的研究 目的：通過一種新的胃

5、腸干細胞標志物DCAMKL-1對FAP患者腺瘤干細胞進行鑒定，并建立腺瘤細胞分離和培養(yǎng)的辦法。研究PCNA、β-catenin、COX-2等蛋白在腺瘤細胞中的表達及這些蛋白與腺瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。 方法：采用免疫組化的方法，對正常結(jié)腸粘膜，F(xiàn)AP腺瘤上皮及癌變的腺瘤上皮進行DCAMKL-1染色，觀察DCAMKL-1陽性表達細胞的位置。對比MSI-1陽性表達細胞的位置，對腺瘤細胞進行Hoechst染色。觀察PCNA、β-cateni

6、n、COX-2等蛋白在腺瘤細胞的表達，并探討β-catenin、COX-2在正常結(jié)腸粘膜，F(xiàn)AP腺瘤上皮及癌變的腺瘤上皮中表達的相關(guān)性。 結(jié)果：在正常結(jié)腸粘膜，F(xiàn)AP腺瘤上皮及癌變的腺瘤上皮中，DCAMKL-1陽性表達細胞主要位于結(jié)腸隱窩的底部，與用于標記腸干細胞的MSI-1陽性表達位置一致，且隨著病變的發(fā)展，在腺瘤中逐漸呈現(xiàn)表達增多的現(xiàn)象。DCAMKL-1陽性表達細胞細胞核不能為Hoechst33342染色。PCNA、β-ca

7、tenin、COX-2的表達均與腺瘤病變的發(fā)展相關(guān)。 結(jié)論：DCAMKL-1是一種新奇的胃腸干細胞的標記物，其陽性表達的細胞可能為家族性腺瘤性息肉病及正常結(jié)腸粘膜的干細胞。對腺瘤的治療關(guān)鍵在于切除腺瘤干細胞，以及抑制與腺瘤病情發(fā)展呈正相關(guān)的COX-2蛋白等。 第二章高頻電切腺瘤性息肉對家族性腺瘤性息肉病裸鼠病程的影響及轉(zhuǎn)歸 目的：建立FAPmin裸鼠模型并考察高頻電切治療對FAPmin裸鼠結(jié)腸腺瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸

8、的影響。 方法：采用N-二乙基亞硝胺灌胃誘變的方法建立了FAPmin裸鼠模型；與高頻電切治療后1、3、6、9、12個月，通過免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測APC、Lgr5、Musashi-1及PTEN蛋白陽性表達率的變化；半定量RT-PCR技術(shù)檢測APC、Lgr5、Musashi-1及PTEN mRNA表達水平的變化；原位末端轉(zhuǎn)移酶標記技術(shù)檢測腺瘤細胞凋亡指數(shù)的變化。 結(jié)果：高頻電切治療后1、3、6、9、12個月，模型組裸鼠結(jié)

9、腸組織中APC、Lgr5、Musashi-1蛋白及基因表達水平顯著升高，而電切組裸鼠上述分子的表達水平則顯著下降，兩組的變化存在差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)；兩組腺瘤細胞凋亡指數(shù)的變化存在差異，模型組腺瘤細胞凋亡指數(shù)從1月到12月的變化范圍為(8.29±0.98)％～(7.76±1.34)％，對照組的變化范圍為(20.08±1.21)％～(32.79±3.62)％，兩組間及組內(nèi)在各個時間點上存在的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01

10、)。 結(jié)論：采用N-二乙基亞硝胺灌胃誘變的方法能夠建立FAPmin裸鼠模型；經(jīng)高頻電切治療FAP，裸鼠的病情得到了控制，并且隨著治療后時間的延長，F(xiàn)APmin裸鼠能夠逐漸恢復(fù)健康。 第三章舒林酸聯(lián)合內(nèi)鏡下高頻電切治療家族性腺瘤性息肉病的臨床研究 目的：探討舒林酸聯(lián)合內(nèi)鏡下高頻電切治療家族性腺瘤性息肉病的新方法及臨床療效。 方法：20例經(jīng)結(jié)腸鏡檢查和組織病理學(xué)檢查確診的家族性腺瘤性息肉病患者，隨機分為兩組，

11、每組10例：舒林酸聯(lián)合內(nèi)鏡組、舒林酸組。舒林酸聯(lián)合內(nèi)鏡組患者，行內(nèi)鏡下高頻電凝、電切及熱活檢鉗治療結(jié)束后即口服舒林酸40.mg/d，療程為12個月；舒林酸組患者，僅口服舒林酸40.mg/d，療程為12個月。兩組患者均為每4個月結(jié)腸鏡復(fù)查一次，觀察腺瘤的數(shù)目、類型、異型增生程度以及治療后腺瘤細胞凋亡指數(shù)變化。 結(jié)果：舒林酸聯(lián)合內(nèi)鏡組于治療后4、8、12個月腺瘤消退率分別為90.96％、95.66％和98.81％，而舒林酸組分別為8

12、0.08％、85.35％和89.78％，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。舒林酸聯(lián)合內(nèi)鏡組患者，經(jīng)治療后腺瘤Ⅲ級異型增生程度明顯降低。舒林酸聯(lián)合內(nèi)鏡組于治療后4、8、12個月腺瘤細胞凋亡指數(shù)分別為(20.08±1.21)％、(25.67±2.07)％、(32.79±3.62)％，舒林酸組分別為(13.29±0.98)％、(19.83±1.56)％、(25.18±2.31)％，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。 結(jié)