仔豬水腫病大腸桿菌SLT-Ⅱe基因突變菌株的構(gòu)建.pdf

1、仔豬水腫病是由產(chǎn)Vero細(xì)胞毒素大腸桿菌(VTEC)引起的致死性傳染病，能引起斷奶仔豬四肢麻痹、步態(tài)蹣跚、痙攣和昏迷等神經(jīng)癥狀，死亡率很高。剖檢可見胃壁和腸系膜水腫，因此稱之為“水腫病”。隨著近幾十年的深入研究，人們對水腫病的致病機(jī)理有了比較詳細(xì)的了解，明確了仔豬水腫病的發(fā)生與產(chǎn)Vero細(xì)胞毒素大腸桿菌的兩個(gè)致病因子——F18ab(F107)菌毛與志賀樣毒素Ⅱ型變異體(SLT-Ⅱe)密切相關(guān)。其中SLT-Ⅱe起主要的毒力作用。

2、本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用定點(diǎn)突變技術(shù)將SLT-Ⅱe基因第167位谷氨酸和第170位精氨酸分別突變?yōu)楣劝滨０泛土涟彼?，再通過同源重組技術(shù)，利用自殺質(zhì)粒pCVD442將突變后的SLT-Ⅱe基因重組到野生的大腸桿菌O<,139>中，替換原有的SLT-Ⅱe基因，構(gòu)建出一株基因突變菌株。用4-6周齡清潔級昆明鼠和Vero細(xì)胞對突變菌株進(jìn)行毒力檢測，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，突變菌株對小鼠腸胃等組織的損傷明顯輕于野生株，而對Vero細(xì)胞的毒力可降至野生株的1/500。通過基