仔豬大腸桿菌病的快速診斷與仔豬腹瀉自家滅活疫苗的研制.pdf

1、仔豬大腸桿菌病仍然是危害我國養(yǎng)豬業(yè)的重要疾病,給養(yǎng)豬業(yè)帶來的損失不可低估,因此研究該病的快速診斷和有效防治方法具有重要意義。
　　 斷奶仔豬水腫病(postweaning edema disease in piglets)是由產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌(shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)感染引起,其初步診斷主要依賴臨床檢查及死后剖檢,確診則必須進行病原菌分離鑒定。本研究根據(jù)發(fā)表的志賀

2、毒素2型變異體(shiga-toxin2e,Stx2e)基因序列設(shè)計1對引物,建立了檢測STEC的PCR方法,經(jīng)已知毒素類型參考菌株檢測證明能夠特異鑒定STEC。采集疑似仔豬水腫病豬死前直腸棉拭子樣品5份和死后十二指腸病料15份,接種LB肉湯,37℃培養(yǎng)4～6h后,用建立的PCR對培養(yǎng)物進行快速檢測,結(jié)果19份為STEC檢測陽性,表明該PCR診斷方法不僅具有簡單、快速、可靠等優(yōu)點,而且適合于病豬死前檢測。
　　 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌

3、(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是仔豬腹瀉(porcine diarrhea)的主要病原。本研究根據(jù)發(fā)表的大腸桿菌腸毒素ST1、ST2、LT1以及耶爾森氏菌強毒力島(high pathogenicity island,HPI)基因序列設(shè)計引物,建立了基于毒力基因檢測ETEC診斷PCR方法。已知毒力型參考菌株的擴增結(jié)果表明,建立的PCR方法能特異鑒定ETEC和HPI+大腸桿菌。采集臨床腹瀉病仔

4、豬肛拭子樣品200份,接種LB肉湯,370C培養(yǎng)4～6h后進行PCR檢測,結(jié)果顯示105份(52.5％)為HPI+大腸桿菌檢測陽性,15份(7.5％)為HPI+大腸桿菌和ETEC檢測陽性,13份(6.5％)為ETEC檢測陽性,表明該方法具有快速、準確和適合活體檢測等優(yōu)點。
　　 為了進一步研究HPI+大腸桿菌與仔豬腹瀉的相關(guān)性,采集臨床腹瀉仔豬和健康仔豬肛拭子樣品,接種LB肉湯,37℃培養(yǎng)4～6h后用上述PCR進行檢測。結(jié)果顯示

5、:在110份臨床腹瀉仔豬肛拭子樣品中,64份(58.18％)為HPI+大腸桿菌檢測陽性;在54份臨床健康仔豬樣品中,僅24份(44.44％)為HPI+大腸桿菌檢測陽性。從64份HPI+大腸桿菌檢測陽性腹瀉仔豬肛拭子樣品中分離得600株大腸桿菌,25株經(jīng)PCR鑒定為HPI+大腸桿菌,其中2株(8％)為F4+,4株(16％)為F6+,2株(8％)為F4+和F6+,1株(4％)為F6+LT1+ST2+。從24份HPI+大腸桿菌檢測陽性臨床健康

6、仔豬肛拭子樣品中分離得480株大腸桿菌,經(jīng)PCR鑒定20株為HPI+大腸桿菌,其中僅1株(5％)為LT1+ST2+,未發(fā)現(xiàn)攜帶菌毛的大腸桿菌。血清學檢測結(jié)果表明,O138為HPI+大腸桿菌的優(yōu)勢抗原型。結(jié)合先前的研究資料可以推測,HPI+大腸桿菌為仔豬腹瀉的條件性致病菌。
　　 為了研制更有針對性的疫苗用于防疫,本研究從江蘇某種豬場采集腹瀉仔豬肛拭樣品40份,經(jīng)短暫液體培養(yǎng)后進行的PCR檢測顯示,62.5％的檢測樣品為HPI+大

7、腸桿菌檢測陽性,12.5％為HPI+大腸桿菌和ETEC檢測陽性,5％為ETEC檢測陽性。從中選擇2個優(yōu)勢菌株制備雙價氫氧化鋁膠滅活自家疫苗,同場母豬免疫接種試驗結(jié)果表明,其所產(chǎn)的46頭仔豬的腹瀉發(fā)病率為23.9％,商品化大腸桿菌三價滅活苗免疫母豬所產(chǎn)仔豬的腹瀉發(fā)生率為28.9％,而非免疫組的仔豬腹瀉發(fā)生率為55.5％。黏附抑制試驗結(jié)果表明,免疫組和對照組母豬分娩后第一天的乳清抗體均能抑制K88+和987P+與豬小腸上皮細胞的黏附,第7天