禽致病性大腸桿菌E058株lpxL、lpxM和lpxP基因突變株構(gòu)建及致病性、免疫特性研究.pdf

1、禽致病性大腸桿菌E 0 5 8 株l p x L 、枷M 和l p x P基因突變株的構(gòu)建及致病性、免疫特性研究C o n s t r u c t i o n ，p a t h o g e n i c i t ya n d i m m u n ec h a r a c t e r i z a t i o no f l p x L 、l p x M a n d l p x P m u t a n t so f a v i a n p a

2、t h o g e n i c E s c h e r i c h i a c o l iE 0 5 8本文受?chē)?guó)家自然科學(xué)基金( 3 1 2 7 2 5 5 9 、3 0 9 7 2 19 6 、3 0 7 7 1 6 0 4 、3 0 4 7 1 2 8 1 ) 、長(zhǎng)江學(xué)者和創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃( P C S I R T 0 9 7 8 ) 資助研究生：許慧卿 導(dǎo)師：高崧教授劉秀梵教授揚(yáng)州大學(xué)揚(yáng)州大學(xué)博士學(xué)位論文l p x L 和l p

3、x M 基因突變株生長(zhǎng)速度受影響；不管是在3 7o C 還是在4 2o C ，所有菌株在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)速度幾乎沒(méi)有差別，但均慢于其在L B 中的生長(zhǎng)速度。L A L 試驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)細(xì)菌濃度為O D 6 0 0 ：0 ．1 時(shí)，除E 0 5 8 A l p x L A l p x M 外，野生株和突變株之間的內(nèi)毒素含量無(wú)顯著差異。與野生株E 0 5 8 相比，l p x L 突變株對(duì)大多數(shù)抗生素的敏感性都有極為顯著的增加，而E 0

4、5 8 A l p x P 的敏感性無(wú)明顯變化。血清殺菌試驗(yàn)證明l p x L 基因突變對(duì)A P E CE 0 5 8 抵抗血清殺菌能力有明顯影響。巨噬細(xì)胞吞噬和胞內(nèi)存活試驗(yàn)表明l p x L 基因突變株侵襲能力顯著下降，且4 h 后在胞內(nèi)的存活率顯著下降。半數(shù)致死量( L D l 5 0 ) 除突變株E 0 5 8 A l p x P 與野生株E 0 5 8 相近外，其余突變株的L D 5 0較E 0 5 8 均有較大程度的下降。2

5、4h 動(dòng)態(tài)分布試驗(yàn)結(jié)果表明，以1 0 8C F U 的濃度左胸氣囊接種，野生株E 0 5 8 在試驗(yàn)雞的帶菌量為脾( 3 ．9 ×1 0 4C F U ．g 。) 、肺( 4 ．4 ×1 0 4C F U ．g 。1 ) 、腎( 9 ．7 ×1 0 3 C F U ．g 。1 ) 、心血( 8 ．7 ×1 0 1C F U ．g 。1 ) 和肝臟( 9 ．2 ×1 0 2C F U ．g

6、 ’1 ) 。突變株E 0 5 8 A l p x P 和E 0 5 8 A l p x M A l p x P 與野生株相近。而E 0 5 8 A l p x L 、E 0 5 8 A l p x M 、E 0 5 8 A l p x L A l p x P 和E 0 5 8 A l p x L A l p x M 心血中均未分離到相應(yīng)菌株。突變株E 0 5 8 A l p x L 肝臟1 ．3C F U ．g ～，脾5 ．6C F

7、U ．g ～i ns p l e e n ，肺2 ．9 ×1 0 2C F U ．g ～，腎9 ．5 x 1 0 1C F U ．g 一，顯著低于野生株；E 0 5 8 A l p x M 在肺和腎中的分布量與E 0 5 8 無(wú)顯著差異，肝中的分布量為3 ．4C F U ．g ～，脾中分布量為1 ．4 x 1 0 2C F U ．g 一，下降顯著。E 0 5 8 A l p x L A l p x P 在肝、脾、肺、腎中的分離

8、量顯著低于野生株。突變株E 0 5 8 A l p x L A l p x M 在肝中未能分離到菌株，與野生株相比在脾、肺和腎中下降極顯著。以濃度為1 ×1 0 1 1 C F U 濃度的E 0 5 8 A l p x L 和E 0 5 8 A l p x L A l p x M 接種試驗(yàn)雞，結(jié)果顯示從各臟器中分離到E 0 5 8 A l p x L 或E 0 5 8 A l p x L A l p x M菌量較1 0 8C

9、F U 接種量的上升1 0 - 1 0 0 倍，與接種1 0 8 C F U E 0 5 8 的相應(yīng)臟器分離量相比，除心血中有顯著下降外，其他臟器差異不顯著?；貜?fù)株R e E 0 5 8 A l p x L 和R e E 0 5 8 A l p x M 在各臟器的分布量與野生株E 0 5 8 相近。病理學(xué)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)E 0 5 8 、E 0 5 8 M p x P 和E 0 5 8 A l p x M A l p x P 對(duì)試驗(yàn)雞的損傷較嚴(yán)

10、重，突變株E 0 5 8 A l p x M 引發(fā)的損傷較輕，突變株E 0 5 8 A l p x L 和E 0 5 8 A l p x L A l p x P 幾乎沒(méi)有肉眼可見(jiàn)的病理學(xué)變化。結(jié)果提示l p x L 和l p x M 基因與S P F 雞的致病力有關(guān)。2 ．E 0 5 8 及其突變株E 0 5 8 A l p x L 、E 0 5 8 A l p x M 和E 0 5 8 A I p x P 來(lái)源L P S 對(duì)L P S