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文檔簡介
1、目的：研究單鏈抗體融合人血白蛋白(HSA-ScFv)在體外對重癥肌無力(MG)的治療作用。
方法：將攜帶有高拷貝重組基因表達載體的畢赤酵母菌GS115菌株復(fù)蘇后，用YPD培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)，再經(jīng)BMGY、BMMY表達培養(yǎng)基培養(yǎng)3天，每24小時添加100％甲醇使甲醇終濃度為1%誘導(dǎo)表達。培養(yǎng)基上清液室溫經(jīng)14000 g離心后，利用斑點雜交試驗（dotblot）初步判定上清液中的融合蛋白；采用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS
2、-PAGE）分析融合蛋白的分子量；蛋白印跡（western blot）實驗進一步確定表達蛋白的特異性；應(yīng)用競爭性ELISA測定法對HSA-ScFv抑制MG患者血清與人乙酰膽堿受體(AChR)結(jié)合率及表達產(chǎn)物穩(wěn)定性進行測定。
結(jié)果：HSA-ScFv637對MG患者血清與人AChR結(jié)合的抑制率可達77.4﹪，其對AChR的這種保護能力可持續(xù)3天，隨著樣品的衰變HSA-ScFv637保護作用減弱至消失。
結(jié)論：HSA-Sc
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