TREM-2對小鼠成纖維細胞增殖與凋亡的影響及VIP的調(diào)控.pdf

1、髓樣細胞表達的觸發(fā)受體-2(TREM-2)是2000年發(fā)現(xiàn)的髓樣細胞表達觸發(fā)受體家族成員，主要表達于巨噬細胞和成纖維細胞等細胞。TREM-2通過激活細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases，ERK)和酪氨酸蛋白激酶(TPK)，可活化部分T細胞;同時ERK信號通路參與抑制脂多糖（LPS）刺激后樹突狀細胞的凋亡。血管活性腸肽(VIP)是肺內(nèi)重要的神經(jīng)調(diào)節(jié)肽。VIP是否可通過影響TRE

2、M-2的表達，影響細胞的凋亡和增殖尚未見報道。
　　 目的：觀察TREM-2與小鼠成纖維細胞凋亡和增殖的關系，初步探討VIP對LPS應激的小鼠成纖維細胞TREM-2表達的影響及其機制。
　　 方法：⑴構建TREM-2過表達質(zhì)粒，按以下分組瞬時轉染至小鼠成纖維細胞：對照組、空質(zhì)粒組和TREM-2過表達質(zhì)粒組。采用熒光顯微鏡觀察12 h和24 h小鼠成纖維細胞的轉染效率;采用RT-PCR檢測小鼠成纖維細胞中TREM-2 mR

3、NA的表達;采用流式細胞術檢測小鼠成纖維細胞的細胞周期；LPS組、LPS+轉染試劑組、LPS+空質(zhì)粒組和LPS+TREM-2過表達質(zhì)粒組。采用PI染色細胞檢測小鼠成纖維細胞的凋亡。⑵采用RT-PCR和流式細胞術分別從mRNA和蛋白水平檢測VIP對LPS應激的小鼠成纖維細胞TREM-2表達的影響;并觀察PKC信號通路阻斷劑(H-7)、PKA信號通路阻斷劑(H-89)、MAPK信號通路阻斷劑(PD98059)和CaM信號通路阻斷劑(W-7)

4、對上述作用的影響。
　　 結果：①熒光顯微鏡檢測結果顯示:轉染12 h后，在小鼠成纖維細胞中觀察到綠色熒光;24h時發(fā)綠色熒光的小鼠成纖維細胞比例約30％。②RT-PCR檢測結果顯示:與對照組（0.22±0.03）和空質(zhì)粒組（0.25±0.03）相比，TREM-2過表達質(zhì)粒組小鼠成纖維細胞中TREM-2mRNA的表達（1.02±0.14）明顯升高(p＜0.01)。③流式細胞術檢測顯示:與空質(zhì)粒組（16.11±1.52）％相比，T

5、REM-2過表達質(zhì)粒組小鼠成纖維細胞處于G2/M期的比率（21.98±2.23）％明顯增加(p＜0.05)。④PI染色細胞檢測凋亡結果顯示:與對照組相比，加入LPS應激后，成纖維細胞中凋亡細胞明顯增多;與LPS組相比，LPS+空質(zhì)粒組凋亡細胞比例無明顯變化，而LPS+TREM-2過表達質(zhì)粒組的凋亡細胞明顯減少。⑤RT-PCR檢測結果顯示:LPS降低小鼠成纖維細胞TREM-2mRNA的表達(p＜0.05)，VIP可呈時間依賴性(0h、3h

6、、6h、12h、24 h)上調(diào)TREM-2 mRNA的表達，且在6h達到峰值(p＜0.01);并呈劑量相關性（10-10 mol/L、10-9mol/L、10-8 mol/L、107 mol/L）上調(diào)TREM-2 mRNA的表達，以10-8 mol/L作用最明顯(p＜0.01)。VIP(10-8 mol/L)對LPS應激6h增加小鼠成纖維細胞TREM-2mRNA表達的效應可被H-7、H-89、PD98059和W-7所阻斷(p＜0.05)

7、。⑥流式細胞術結果顯示:LPS降低小鼠成纖維細胞TREM-2蛋白的表達（6848±1723.15;p＜0.05），VIP可上調(diào)TREM-2蛋白的表達(23618±2888.44; p＜0.01)。VIP(10-8 mol/L)對LPS應激6h增加小鼠成纖維細胞TREM-2蛋白表達的效應可被H-7、H-89、PD98059和W-7所阻斷(p＜0.05)。
　　 結論：⑴TREM-2促進小鼠成纖維細胞的增殖。⑵TREM-2抑制小鼠成