CFH基因rs1061170多態(tài)性與冠心病的關(guān)系研究.pdf

1、一、研究背景與目的
　　 冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(coronary heart disease，CHD)是遺傳和環(huán)境危險(xiǎn)因素相互作用的多基因疾病，成為我國(guó)主要的心血管疾病的病因和死因。CHD的病理基礎(chǔ)是動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)，其本身就是動(dòng)脈血管壁的慢性炎癥反應(yīng)的過(guò)程和結(jié)果。炎癥、天然免疫和遺傳因素在AS疾病的病理生理中起著重要的作用。補(bǔ)體系統(tǒng)是免疫系統(tǒng)的重要組成成分，是產(chǎn)生和維持動(dòng)脈內(nèi)膜炎癥反應(yīng)的

2、關(guān)鍵因子之一，廣泛參與機(jī)體微生物的防御反應(yīng)以及免疫調(diào)節(jié)，并可以介導(dǎo)免疫的病理?yè)p傷。其中，補(bǔ)體系統(tǒng)，尤其是補(bǔ)體因子H(complement factor H，CFH)的基因多態(tài)性及其編碼的蛋白質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化性疾病及相關(guān)疾病的關(guān)系研究成為近年來(lái)從分子生物學(xué)角度研究的熱點(diǎn)。
　　 在AS的易損斑塊和破裂的斑塊處，補(bǔ)體大量激活。CFH作為一個(gè)血清中重要的調(diào)節(jié)蛋白，通過(guò)抑制旁路途徑C3轉(zhuǎn)化酶的的組裝調(diào)控旁路途徑，由此控制補(bǔ)體系統(tǒng)進(jìn)一步的

3、活化，在旁路途徑的激活過(guò)程中發(fā)揮著調(diào)控作用和抗炎活性。CFHrs1061170基因位點(diǎn)為1277位置上堿基突變所致氨基酸的序列改變(CFHY402H)，組氨酸取代酪氨酸的氨基酸序列的改變將影響CFH對(duì)C3b的親和力，使CFH的滅活和抗炎作用減低，影響其抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。國(guó)外研究表明CFH基因多態(tài)性和CHD相關(guān)。本研究通過(guò)熒光定量PCR法(realtime fluores-cence quantitative PCR，RTFQ PCR

4、)分析CFH的基因型頻率分布，探討CFH基因多態(tài)性與CHD的相關(guān)性及比較不同基因型各亞組間的臨床代謝參數(shù)。
　　 二、研究?jī)?nèi)容
　　 1.研究對(duì)象及分組
　　 篩選2008年10月-2009年6月在我院心內(nèi)科住院的患者243例且同意加入本研究的重慶漢族人群。所有入選病例均行冠脈造影(coronary arteriography，CAG)，診斷均符合1979年WHO頒布的缺血性心臟病的診斷標(biāo)準(zhǔn)(以左冠脈為主干、左前

5、降支、左回旋支和右冠狀動(dòng)脈及其主要分支中至少有一支冠脈動(dòng)脈≥50%為有意義病變)。根據(jù)冠狀動(dòng)脈造影術(shù)證實(shí)確診并進(jìn)行分組：冠心病組175例(男性107例，女性68例)，平均年齡64.65±10.89歲；對(duì)照組68例(男性32例，女性36例)，平均年齡57.59±11.63歲。
　　 2.研究方法
　　 所有研究對(duì)象均為重慶漢族人群，收集臨床資料如下：姓名、年齡、性別、收縮壓(systolic blood pressure，

6、SBP)、舒張壓(diastolic blood pressure，DBP)、身高、體重(kg)、計(jì)算體質(zhì)量指數(shù)(body mass index，BMI)=體重/身高2(kg/m2)、心血管疾病家族史、飲酒、吸煙史、體力活動(dòng)和主要飲食習(xí)慣，除外腦卒中、炎癥、風(fēng)濕性疾病、肝腎功能不全、腫瘤及近期感染史。符合入選標(biāo)準(zhǔn)的患者空腹抽取靜脈血3ml行實(shí)驗(yàn)室檢查：尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、肌酐(creatinine，

7、Cr)、尿酸(uric acid，UA)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、載脂蛋白B(apolipoprotein B，APO-B)、甘油三酯(triglyceride，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TC)。在全自動(dòng)分析儀上檢測(cè)空腹血

8、糖(fasting blood glucose，F(xiàn)BG)、空腹胰島素(fasting insulin，F(xiàn)IN)、胰島素抵抗指數(shù)(insulin resistance index，IRI)(根據(jù)HOMA Model計(jì)算：IRI=FIN×FBG/22.5)。另行抽取2ml外周靜脈血提取DNA，EDTA抗凝處理，保存于-20℃冰箱中，并隨機(jī)選取40例標(biāo)本進(jìn)行DNA測(cè)序；設(shè)計(jì)Taqman探針對(duì)所有入院標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行熒光定量PCR法測(cè)量。統(tǒng)計(jì)分析用SP

9、SS15.0 for Windows軟件，將統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)輸入EXCEL數(shù)據(jù)庫(kù)，計(jì)算冠心病與對(duì)照組的Hardy-Weinberg(哈迪-韋因貝格定理平衡)。計(jì)量資料以-x±s表示。單因素采取方差分析和x2檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)分析。以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。統(tǒng)計(jì)分析比較冠心病組和對(duì)照組之間基本臨床資料的差異，分析CFH基因rs1061170單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，

10、SNP)基因的頻率分布及不同CFH基因型頻率分布之間各生化指標(biāo)的分布差異。
　　 三、研究結(jié)果
　　 1.臨床資料對(duì)比，冠心病組選取對(duì)象均符合WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)，冠心病組和對(duì)照組兩組間的IRI、Apo-B、TC、BUN、腹圍、性別等基本情況無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。冠心病組年齡、高血壓史、吸煙史、TG、TC、LDL-C均顯著高于對(duì)照組，而HDL-C濃度低于對(duì)照組(P<0.05)。
　　 2.隨機(jī)選取40例樣本(包括冠心病組及對(duì)照

11、組)的DNA進(jìn)行CFHrs1061170基因位點(diǎn)的直接測(cè)序，結(jié)果為兩種不同的CFH基因型測(cè)序結(jié)果，分別為純合子(TT基因型)37例，雜合子(TC)3例。
　　 3.對(duì)兩組之間進(jìn)行熒光定量PCR法，冠心病組CFH基因rs1061107中TT、TC、CC基因型頻率分別為87.4%、12.6%、0，而對(duì)照組CFH基因rs1061107中分別為94.1%、5.9%、0。兩組基因型頻率分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=2.293，OR=2.301，

12、95%CI=0.762-6.943，P>0.05)；冠心病組和對(duì)照組T等位基因頻率分別為85.3%、97.05%。兩組等位基因頻率分布無(wú)顯著差異(x2=2.164，OR=2.213，95%CI=0.748-6.546，P>0.05)。
　　 4.通過(guò)對(duì)兩組之間的臨床代謝參數(shù)攜帶不同的基因型的對(duì)比，發(fā)現(xiàn)冠心病組中TC基因人群的SBP、DBP、BUN、Cr明顯高于TT基因人群(P<0.05)。
　　 四、結(jié)論