凝血因子ⅩⅢVa134Leu基因多態(tài)性與冠心病關(guān)系的研究.pdf

1、近年研究發(fā)現(xiàn)FXⅢ基因的2號外顯子第34號密碼子發(fā)生的G→T的點突變(FXⅢVal34Leu)對靜脈血栓形成有對抗作用,對出血性疾病有促進(jìn)作用.可能的機(jī)制為FXⅢVal34Leu所促使形成的纖維蛋白凝塊的質(zhì)量/長度比率減低,從而影響了纖維塊的結(jié)構(gòu),導(dǎo)致纖維蛋白的無效交聯(lián)或缺乏其他因子的交聯(lián),從而起到保護(hù)作用.材料與方法一、研究對象:398例相互無血緣關(guān)系的中國漢族人.冠心病組195例[男154例,女41例,平均年齡(64.25±9.34

2、)歲],為浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬二院心內(nèi)科住院病人,全部經(jīng)冠狀動脈造影證實.冠狀動脈病變以至少一支主要血管直徑狹窄程度≥50﹪為陽性.并根據(jù)WHO關(guān)于心肌梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn)分為心肌梗死組(87例)和非心肌梗死組(108例).對照組203例[男145例,女58例,平均年齡62.54±8.77)歲],為冠狀動脈造影正常者及門診健康體驗者,經(jīng)嚴(yán)格病史詢問無冠心病和心肌梗死病史,心電圖正常.二、方法:1.一般臨床資料的收集:所有受試者均詳細(xì)詢問有無高血

3、壓、糖尿病、高脂血癥、吸煙史、并測定身高、體重及部分生化指標(biāo).2.FXⅢVal34Leu基因型分析:采用PCR-SSCP技術(shù).(1)引物設(shè)計與合成:參照Kohler和Kangsadalampai提出的引物,出上海生物工程公司合成,引物序列:上游引物5′-GAC CTT GTA AAG TCA′AAA ATG TC-3′;下游引物5′-TAC CTT GCA GGT TGA CGC CCC GGG GC工CTA-3′.(2)提取模板DNA

4、:EDTA抗凝周圍靜脈血,酚/氯仿法提取DNA.(3)PCR擴(kuò)增:反應(yīng)體系25ul,其中含10×PCR緩沖液2.5ul,Mgcl<,2>l~3umol/L,dNTP各200umol/L,模板DNAO.lug,Tap酶2U,上下游引物各10pmol.擴(kuò)增條件:94℃變性30sec,53℃退火30sec,72℃延伸30sec,30個循環(huán)后,72℃延伸5min.(4)SSCP分析:非變性聚丙烯酸胺凝膠濃度為12﹪(29:1),其中含5﹪甘油;