內(nèi)皮脂酶單基因多態(tài)性與冠心病的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、冠心病是由遺傳和環(huán)境等多種因素導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈粥樣硬化(AS)而使血管腔狹窄阻塞導(dǎo)致心肌缺血缺氧或壞死而引起的一種心臟疾病，其致死率高且發(fā)病率呈逐年上升趨勢。目前的相關(guān)研究表明，血漿中較低的高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)與冠心病(CAD)的發(fā)病密切相關(guān)，而較高的HDL-C水平可以降低發(fā)生CAD的風(fēng)險(xiǎn)。血漿中的HDL-C濃度不但受到環(huán)境因素影響，而且具有高度的遺傳性。而目前的遺傳學(xué)研究提示，HDL-C的遺傳異質(zhì)性與調(diào)節(jié)HDL代謝的內(nèi)皮脂酶(

2、LIPG)的基因多態(tài)性有關(guān)。因此，本研究采用病例-對照的方法，對內(nèi)皮脂酶基因的單核苷酸多態(tài)性(SNP)與冠心病進(jìn)行群體關(guān)聯(lián)分析，來探索冠心病的易感基因，對于開展有針對性地人群預(yù)防，延緩和防止冠心病的發(fā)生發(fā)展有重要意義。
　　 內(nèi)皮脂酶(Endothelial lipase，EL)作為甘油三酯脂酶家族的成員，與脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase，LPL)、肝脂酶(Hepatic lipase，HL)具有高度的同源性，

3、在脂質(zhì)代謝特別是HDL-C代謝過程中起著非常重要的調(diào)節(jié)作用。內(nèi)皮脂酶的主要活性為磷脂酶活性，HDL顆粒是其優(yōu)先選擇的底物。Ishida等人進(jìn)行的小鼠體內(nèi)試驗(yàn)表明，EL mRNA的表達(dá)與HDL-C水平之間存在明確的負(fù)相關(guān)；Badellino等人發(fā)現(xiàn)人體內(nèi)血漿中的EL濃度與HDL-C水平之間存在顯著負(fù)相關(guān)。
　　 內(nèi)皮脂酶除了參與脂質(zhì)代謝，它還與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。一方面，它參與內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)的調(diào)控，可能是通過影響內(nèi)皮細(xì)胞黏附分

4、子表達(dá)來參與動(dòng)脈粥樣硬化的病理生理過程的；另一方面，內(nèi)皮脂酶的表達(dá)受到炎癥反應(yīng)相關(guān)細(xì)胞因子的影響，如腫瘤壞死因子α(tumornecrosisfactor，TNF-α)、白細(xì)胞介素-β(interleukin-β，IL-β)等可使內(nèi)皮脂酶表達(dá)增加。因而推測EL可能參與了AS的形成和發(fā)展。
　　 目前，已有少量文獻(xiàn)報(bào)道了在小樣本特定種族人群中關(guān)于LIPG-C584T/ex3、T42C/in5兩個(gè)基因變異位點(diǎn)的研究，結(jié)果表明攜帶這兩

5、個(gè)變異位點(diǎn)的人群與HDL-C水平相關(guān)。然而，在更大范圍內(nèi)的人群中，尚不清楚這些變異是否與血漿中的脂質(zhì)水平及冠心病(CAD)相關(guān)。事實(shí)上，對于EL的研究尚處于初始階段，目前關(guān)于EL基因多態(tài)性研究主要集中在與HDL膽固醇表型的關(guān)系上，而與冠心病關(guān)系的研究尚未有大樣本報(bào)道，并且一些報(bào)道結(jié)論還存在不一致?；谝陨涎芯勘尘埃菊撐尼槍幼≡诒本┑貐^(qū)及其附近省市的中國漢族人群，采用大樣本病例.對照的群體關(guān)聯(lián)分析方法，來探究EL基因C584T/ex3

6、和T42C/in5兩個(gè)位點(diǎn)與血漿脂質(zhì)水平及冠心病的相關(guān)性。
　　 研究目的：
　　 (1)研究中國漢族人群冠心病患者和正常對照人群中內(nèi)皮脂酶基因C584T/ex3和T42C/in5位點(diǎn)的變異情況，比較冠心病患者和正常對照人群之間兩個(gè)位點(diǎn)基因型和等位基因頻率的差異，探索內(nèi)皮脂酶基因與冠心病的相關(guān)性；
　　 (2)分析中國漢族人群中內(nèi)皮脂酶基因C584T/ex3和T42C/in5位點(diǎn)多態(tài)性與血漿脂質(zhì)水平的相關(guān)性，進(jìn)而

7、探討內(nèi)皮脂酶基因在冠心病發(fā)病過程中發(fā)揮的作用。
　　 研究方法：
　　 (1)本研究共入組了2007年1月至2009年4月在北京協(xié)和醫(yī)院心內(nèi)科心內(nèi)科經(jīng)冠脈造影確診的冠心病患者941例，正常對照組為年齡匹配的同期協(xié)和醫(yī)院體檢非冠心病人群794例，所有研究對象均為漢族人群。收集并統(tǒng)計(jì)分析入組樣本的血糖、血脂、冠狀動(dòng)脈病變情況等臨床資料。
　　 (2)研究對象空腹8小時(shí)后采取靜脈全血，EDTA抗凝，2000轉(zhuǎn)離心10分

8、鐘分離血漿和血細(xì)胞，從單核細(xì)胞中提取DNA；
　　 (3)采用Taqman探針熒光定量PCR法對內(nèi)皮脂酶基因C584T/ex3和T42C/in5位點(diǎn)進(jìn)行基因分型，對上述兩個(gè)位點(diǎn)的基因型進(jìn)行遺傳學(xué)分析；
　　 (4)對上述基因位點(diǎn)多態(tài)性與臨床資料進(jìn)行相關(guān)性分析；
　　 (5)用ELISA方法測定血漿中內(nèi)皮脂酶的濃度，與血脂水平進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　 研究結(jié)果：
　　 (1)本論文研究共納入冠心病患者

9、941例(中位年齡為62歲，男女人數(shù)比例為695:246)，對照組794名例(中位年齡為60歲，男女人數(shù)比例為496:298)，兩組人群年齡匹配(P＝0.083)，性別存在顯著性差異(P<0.001)。對兩組人群進(jìn)行危險(xiǎn)因素分布的比較，發(fā)現(xiàn)高血壓、糖尿病、高膽固醇血癥、吸煙、冠心病家族史、肥胖、低HDL-C血癥的比例在兩組之間均有極顯著差異，冠心病組均明顯高于對照組。比較冠心病組和正常對照組的血脂、血糖、BMI、UA等計(jì)量臨床資料，發(fā)現(xiàn)

10、冠心病組的BMI、ALT、Alb、TG、HSCRP、FBG、UA水平高于對照組，而冠心病的HDL-C、ApoA-I、TC、LDL-C組低于對照組，以上指標(biāo)在兩組之間均存在顯著性差異。
　　 (2)對研究中的冠心病患者和對照人群進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，結(jié)果表明兩個(gè)SNP位點(diǎn)均符合Hardy-Weinberg平衡，P>0.05，這說明樣本來自普遍人群。
　　 (3)內(nèi)皮脂酶基因C584T/ex3和T42C/

11、in5兩個(gè)位點(diǎn)的基因型和基因頻率在冠心病組和正常對照組之間無顯著性差異；
　　 (4)對冠心病患者亞組與對照組進(jìn)行分析，結(jié)果表明內(nèi)皮脂酶基因C584T/ex3及T42C/in5兩個(gè)位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率，在冠心病合并/不合并糖尿病患者和對照組之間、冠心病合并/不合并高血壓患者和對照組之間、冠心病心?；颊?冠心病非心?；颊吆蛯φ战M之間、早發(fā)冠心病患者和對照組之間、不同病變支數(shù)的冠心病患者之間以及不同狹窄程度的冠心病患者之間，均

12、無顯著性差異。
　　 (5)無論在男性人群還是女性人群中，內(nèi)皮脂酶基因C584T/ex3及T42C/in5兩個(gè)位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率在冠心病患者對照組之間無顯著性差異。
　　 (6)內(nèi)皮脂酶基因C584T/ex3和T42C/in5兩個(gè)位點(diǎn)間存在連鎖不平衡關(guān)系，形成3種頻率大于3％的單體型；
　　 (7)C584T/ex3、T42C/in5位點(diǎn)形成的單體型與冠心病及心梗均無相關(guān)性；
　　 (8)對C58

13、4T/ex3、T42C/in5兩位點(diǎn)分別進(jìn)行單因素logistic回歸分析，結(jié)果顯示兩位點(diǎn)變異與冠心病均無相關(guān)性；
　　 (9)分別對冠心病患者、正常人群、男性人群、女性人群中C584T/ex3位點(diǎn)的各基因型個(gè)體的血脂、空腹血糖、尿酸、BMI等計(jì)量資料進(jìn)行比較，結(jié)果顯示:在冠心病組、對照組、男性人群中C584T/ex3位點(diǎn)TT基因型的UA水平均高于CC型和CT型；其余指標(biāo)在不同基因型之間則無顯著性差異。
　　 (10)分

14、別對冠心病患者、正常人群、男性人群、女性人群中T42C/in5位點(diǎn)的各基因型個(gè)體的血脂、空腹血糖、尿酸、BMI等計(jì)量資料進(jìn)行比較，結(jié)果顯示:在對照組人群中，T42C/in5位點(diǎn)CC基因型的ApoA-I水平高于TT型和TC型；在冠心病組、男性人群中T42C/in5位點(diǎn)CC基因型的UA水平高于TT型和TC型；其余指標(biāo)在不同基因型之間則無顯著性差異。
　　 (11)對EL濃度與年齡、性別、血脂、血糖、UA、BMI之間進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)

15、現(xiàn)EL濃度與TG、BMI水平呈正相關(guān)(P<0.01)，相關(guān)系數(shù)分別為0.238和0.149；EL濃度與HDL-C水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，相關(guān)系數(shù)為-0.159。
　　 研究結(jié)論：
　　 (1)未發(fā)現(xiàn)EL基因C584T/ex3、T42C/in5位點(diǎn)變異與中國漢族人群冠心病發(fā)病有顯著相關(guān)性；
　　 (2)未發(fā)現(xiàn)EL基因C584T/ex3位點(diǎn)變異與中國漢族人群HDL-C以及其他血脂和脂蛋白具有顯著相關(guān)性；