高效液相色譜熒光法測(cè)定血清犬尿氨酸和犬尿喹啉酸及其臨床應(yīng)用.pdf

1、目的：1.建立一種簡(jiǎn)單、快速并能同時(shí)測(cè)定血清中的犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)的高效液相色譜-熒光檢測(cè)法(HPLC-FLD)。 2.探討血液標(biāo)本的采集與保存對(duì)犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)測(cè)定結(jié)果的影響。 3.用該方法建立正常人血清犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)含量以及KYNA/KYN比值參考值范圍。 4.初步探討慢性腎功能衰竭(CRF)中血清犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(K

2、YNA)含量以及KYNA/KYN比值的臨床意義。 方法：1.血清標(biāo)本與等量5％(V/V)高氯酸溶液混合處理去除蛋白后離心取上清液20μl直接進(jìn)樣分析。用Hypersil C8柱(300mm×6.0mm i.d.，10μm)分離；流動(dòng)相為0.25mol/L醋酸鋅及50mmol/L醋酸溶液(含3％乙腈v/v)；流速1.5ml/min；熒光檢測(cè)波長(zhǎng)：0-10min激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為365nm和480nm，10min后激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)

3、射波長(zhǎng)分別變換為344nm和404nm。室溫下約15分鐘完成分析測(cè)定。KYN和KYNA均采用峰保留值比較法和疊加法進(jìn)行定性分析，用外標(biāo)法測(cè)定峰面積進(jìn)行定量分析?？疾炝?-羥色胺(5-HT)、色氨酸(TRP)、苯丙氨酸(PHE)、酪氨酸(TYR)和肌酐(Cr)等對(duì)待測(cè)組分(KYN和KYNA)的可能干擾。 2.利用高效液相色譜-熒光法檢測(cè)法測(cè)定EDTA-K2抗凝血漿及血清在室溫(25±1)℃、4℃、冰凍(-20℃)保存下0、24、7

4、2、120、168h后KYN和KYNA的濃度。 3.測(cè)定健康體檢者(n=71例)血清KYN和KYNA含量，并計(jì)算KYNA/KYN比值，以95％可信限界定相應(yīng)參數(shù)的范圍。 4.測(cè)定慢性腎衰竭(CRF)患者(n=76例)血清KYN、KYNA含量，探討慢性腎衰患者不同階段血清KYN和KYNA含量變化及其在鑒別診斷、治療監(jiān)測(cè)、機(jī)制研究等方面的臨床意義。 結(jié)論： 1.本文建立的HPLC-FLD法可同時(shí)測(cè)定血清KYN和KYN

5、A，方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏、特異、準(zhǔn)確，適宜于臨床與科研工作。 2.EDTA-K2抗凝血漿和血清KYN和KYNA測(cè)定結(jié)果差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血清標(biāo)本在室溫(25℃±1)條件下可穩(wěn)定三天，若不能及時(shí)檢測(cè)時(shí)，最好置于≤-20℃條件下保存。 3.在國(guó)內(nèi)首次使用HPLC-FLD同時(shí)測(cè)定正常人血清中KYN和KYNA含量和KYNA/KYN比值，可為相關(guān)研究工作提供參考數(shù)據(jù)。 4.通過(guò)對(duì)CRF患者血清KYN和KYNA含量的測(cè)定，