高效液相色譜熒光法測定血清犬尿氨酸和犬尿喹啉酸及其臨床應用.pdf

1、目的：1.建立一種簡單、快速并能同時測定血清中的犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)的高效液相色譜-熒光檢測法(HPLC-FLD)。 2.探討血液標本的采集與保存對犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)測定結(jié)果的影響。 3.用該方法建立正常人血清犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)含量以及KYNA/KYN比值參考值范圍。 4.初步探討慢性腎功能衰竭(CRF)中血清犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(K

2、YNA)含量以及KYNA/KYN比值的臨床意義。 方法：1.血清標本與等量5％(V/V)高氯酸溶液混合處理去除蛋白后離心取上清液20μl直接進樣分析。用Hypersil C8柱(300mm×6.0mm i.d.，10μm)分離；流動相為0.25mol/L醋酸鋅及50mmol/L醋酸溶液(含3％乙腈v/v)；流速1.5ml/min；熒光檢測波長：0-10min激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為365nm和480nm，10min后激發(fā)波長和發(fā)

3、射波長分別變換為344nm和404nm。室溫下約15分鐘完成分析測定。KYN和KYNA均采用峰保留值比較法和疊加法進行定性分析，用外標法測定峰面積進行定量分析?？疾炝?-羥色胺(5-HT)、色氨酸(TRP)、苯丙氨酸(PHE)、酪氨酸(TYR)和肌酐(Cr)等對待測組分(KYN和KYNA)的可能干擾。 2.利用高效液相色譜-熒光法檢測法測定EDTA-K2抗凝血漿及血清在室溫(25±1)℃、4℃、冰凍(-20℃)保存下0、24、7

4、2、120、168h后KYN和KYNA的濃度。 3.測定健康體檢者(n=71例)血清KYN和KYNA含量，并計算KYNA/KYN比值，以95％可信限界定相應參數(shù)的范圍。 4.測定慢性腎衰竭(CRF)患者(n=76例)血清KYN、KYNA含量，探討慢性腎衰患者不同階段血清KYN和KYNA含量變化及其在鑒別診斷、治療監(jiān)測、機制研究等方面的臨床意義。 結(jié)論： 1.本文建立的HPLC-FLD法可同時測定血清KYN和KYN

5、A，方法簡單、快速、靈敏、特異、準確，適宜于臨床與科研工作。 2.EDTA-K2抗凝血漿和血清KYN和KYNA測定結(jié)果差異均無統(tǒng)計學意義。血清標本在室溫(25℃±1)條件下可穩(wěn)定三天，若不能及時檢測時，最好置于≤-20℃條件下保存。 3.在國內(nèi)首次使用HPLC-FLD同時測定正常人血清中KYN和KYNA含量和KYNA/KYN比值，可為相關(guān)研究工作提供參考數(shù)據(jù)。 4.通過對CRF患者血清KYN和KYNA含量的測定，