黃金茶鮮葉中原花青素單體含量及與ANR、LAR表達的關系.pdf

1、兒茶素類物質(zhì)（原花青素單體）是茶葉的主要活性成分之一，其含量多少和結構類型直接影響茶葉品質(zhì)及保健功效。黃金茶是湖南湘西特有、珍稀和優(yōu)質(zhì)的茶樹資源，具有廣闊的市場開發(fā)潛力。目前有關黃金茶中原花青素類次生代謝物的研究涉及甚少，關于其生物合成機理的研究仍是空白。本研究以黃金茶1號和2號品系為實驗材料，研究內(nèi)容和結果如下：
　?。?）采用有機溶劑萃取法提取春、夏和秋季黃金茶不同發(fā)育時期鮮葉中原花青素，利用HPLC同時測定兒茶素(C)、表兒

2、茶素(EC)、沒食子兒茶素(GC)、表沒食子兒茶素(EGC)和表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)的含量，并分析其分布規(guī)律。結果表明，夏季各原花青素單體含量最高，春季最低，即夏季>秋季>春季；從組成分布和變化規(guī)律來看，春季葉片中，EGC和EGCG含量相對較高，其他單體含量較低；各單體含量均隨著葉片發(fā)育先上升然后下降。夏季葉片中，EGC和C相對較高；各單體含量也隨葉片發(fā)育先升高再降低；秋季葉片中，EC和EGCG含量相對較高；各原花青素含量

3、也表現(xiàn)出先上升后下降的趨勢。兩個品系在兒茶素類物質(zhì)的生物積累和變化方面無顯著差別。
　?。?）采用RT-PCR法從黃金茶幼嫩葉片中分離無色花青素還原酶基因（LAR）花青素還原酶基因（ANR），克隆至 T載體進行測序和生物信息學分析。成功獲得了CsLAR和CsANR基因，序列分析表明兩基因全長為1044 bp和1029 bp，預測分別編碼347 aa和342 aa的蛋白質(zhì)，生物信息學分析發(fā)現(xiàn)兩基因編碼蛋白理化性質(zhì)和三維結構基本與其對

4、應的無色花青素還原酶家族和花青素還原酶家族蛋白特征一致。
　?。?）以β-actin為內(nèi)參基因，通過實時定量PCR研究了CsANR、CsLAR在不同季節(jié)、不同發(fā)育時期黃金茶葉片中的表達模式，分析原花青素4種相關單體（C和GC、EC和EGC）分布與CsLAR、CsANR表達水平的關系。結果顯示，在春季和秋季，CsANR、CsLAR表達量與原花青素各單體含量變化趨勢一致。在夏季，黃金茶1號鮮葉中CsANR表達量與對應原花青素單體（EC

5、和EGC）含量變化趨勢一致，CsLAR表達量與對應原花青素單體無相關性；黃金茶2號鮮葉中CsLAR表達量與對應原花青素單體（C和GC）含量變化趨勢一致，CsANR表達水平與對應原花青素單體含量無相關性。總體而言，在春季，黃金茶鮮葉中CsANR與CsLAR的表達量基本一致，夏、秋季黃金茶鮮葉中CsLAR的表達量要高于CsANR的表達量。實驗結果證明，EGC和EGCG是黃金茶1號和2號品系中兒茶素類活性物質(zhì)的主要成分；茶葉中原花青素單體總量