非血緣臍血移植后移植物抗白血病效應(yīng)機制的初步研究.pdf

1、目的:本研究先通過檢測初診急性白血病患者自然殺傷(natural killer，NK)細胞表面活化性受體 NKG2D及其相應(yīng)配體MICs和ULBPs的表達情況來探索急性白血病患者免疫逃避的可能機制，再通過檢測臍血移植（Umbilical cord blood transplantation,UCBT）后白血病患者NK細胞亞型及表面受體的重建情況和NK細胞的殺傷功能來初步探索UCBT后移植物抗白血?。℅raft versus Leukem

2、ia，GVL）效應(yīng)的機制。
　　 方法:第一部分：選擇30例初診急性白血病患者，應(yīng)用流式細胞術(shù)（FCM）檢測白血病細胞表面MICA/B，ULBP1-3等的表達水平，ELISA法檢測血清可溶性MICA/B(sMICA/B)及可溶性ULBP1-3(sULBP1-3)水平。10例健康人為對照。第二部分：選擇接受UCBT的急性白血病患者14例，F(xiàn)CM檢測UCBT后第1～4個月和第6個月患者外周血中NK細胞數(shù)量、亞型和NK細胞表面受體譜的

3、表達，同時檢測UCBT后T細胞、B細胞的表達，10名健康志愿者做為對照。并取UCBT后1、3、6個月時患者外周血單個核細胞，用LDH釋放法K562細胞為靶細胞進行體外殺傷實驗，正常志愿者外周血單個核細胞作為對照。
　　 結(jié)果:①初診白血病患者外周血中NK細胞活化性受體NKG2D及其配體表達情況：白血病患者外周血中NK細胞表面NKG2D的表達水平[(60.23土11.06)％]顯著低于正常對照組[(94.5±4.68)％)] (P

4、<0.01)，白血病細胞表面不表達或弱表達MICA/B及ULBP1-3，血清中sMICA/B水平分別為63.42±45.78pg/ml及121.57±63.8pg/ml，均顯著高于對照(P<0.01)，sULBP1-3水平與對照組無明顯差異。②UCBT后淋巴細胞各亞群的重建：所有受者NK細胞的恢復(fù)較早而迅速，第2個月后回落到正常水平。T細胞、B細胞移植后早期表現(xiàn)出由極低水平逐漸緩慢恢復(fù)過程，T細胞直至第4個月開始、B細胞第6個月始漸接近

5、正常水平。③UCBT后NK細胞亞群及表面受體重建：UCBT后6個月內(nèi)CD3-CD16+CD56brightNK亞群占CD3-CD16+CD56+細胞中比例(最高達63.4±16.5％)較正常對照（14.51±4.99％）顯著增多。7/14例無并發(fā)癥患者外周血中出現(xiàn)新的NK亞群CD3-CD16+CD56-細胞占淋巴細胞比例為12.42±10.47％。NKG2A/CD94移植后早期表達顯著高于正常對照組，NKG2D在移植后早期較正常對照輕度

6、下降，移植后第6個月恢復(fù)正常。NKP46在移植后第1個月即明顯高于正常對照組（分別為77.34±17.49和57.38±11.04％），之后又緩慢恢復(fù)正常水平。CD158a在移植后6個月內(nèi)始終低于正常對照水平，但持續(xù)緩慢上升，而CD158b的表達與正常對照組無顯著差異。④UCBT后早期恢復(fù)的NK細胞體外殺傷功能較正常對照組無顯著差異。
　　 結(jié)論：白血病患者NK細胞活化性受體NKG2D－配體途徑受損可能是白血病細胞免疫逃逸重要機