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1、目的:探討核因子—κB(NF—κB)在梗阻性黃疸肝損傷中的作用及維拉帕米對(duì)其表達(dá)的影響。 方法: (1)將雄性SD大鼠48只隨機(jī)分成膽總管結(jié)扎組(BDL組)、膽總管結(jié)扎+維拉帕米組(BDL+V組)、假手術(shù)組(Sham組),每組16只。 (2)氯胺酮腹腔注射麻醉后經(jīng)腹游離膽總管并結(jié)扎、切斷,制作梗阻性黃疸大鼠模型。Sham組僅開(kāi)腹后游離膽總管,不結(jié)扎切斷膽總管。 (3)BDL+V組術(shù)后第一天起,每天腹腔注射
2、維拉帕米2 mg/kg,直至處死。Sham組和BDL組則同期腹腔注射等量生理鹽水。 (4)分別于術(shù)后第7天、14天處死大鼠。取肝組織行HE染色常規(guī)病理,TUNEL法觀察肝細(xì)胞凋亡,采用免疫組化法及蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)肝組織NF—κB p65蛋白表達(dá)以及丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。經(jīng)下腔靜脈取血測(cè)定血清總膽紅素(TB)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、腫瘤壞死因子—α(TNF—α)和白細(xì)胞
3、介素-6(IL-6)。 結(jié)果: (1)肝臟病理形態(tài)學(xué)觀察:膽總管結(jié)扎術(shù)后第7天、14天取標(biāo)本見(jiàn)肝臟腫大呈黃褐色,膽總管近端明顯擴(kuò)張,且張力很高;假手術(shù)對(duì)照組無(wú)上述改變。光鏡下肝臟病理改變:BDL組大鼠可見(jiàn)小膽管增生,匯管區(qū)炎性細(xì)胞浸潤(rùn),14天標(biāo)本見(jiàn)大量小膽管增生,部分區(qū)域肝細(xì)胞出現(xiàn)變性、壞死;相同時(shí)間點(diǎn)BDL+V組大鼠肝細(xì)胞變性壞死較BDL組輕;Sham組大鼠無(wú)明顯變化。 (2)肝組織NF—κ B p65表達(dá):B
4、DL+V組NF—κ B p65的表達(dá)在7天和14天均明顯低于BDL組;Sham組大鼠肝組織僅有微弱表達(dá)。 (3)肝細(xì)胞凋亡情況:BDL組及BDL+V組均見(jiàn)大量細(xì)胞凋亡;但在BDL+V組凋亡細(xì)胞數(shù)低于BDL組;Sham組肝細(xì)胞僅見(jiàn)少量凋亡。 (4)肝組織MDA和SOD含量的變化:BDL組及BDL+V組大鼠血清MDA含量均明顯高于Sham組而SOD明顯低于Sham組;但在BDL+V組MDA含量低于BDL組;而SOD高于BDL
5、組。 (5)血清TNF—α和IL-6的變化:BDL組及BDL+V組大鼠血清TNF—α、IL-6均明顯高于Sham組;但BDL+V組大鼠血清TNF—α和IL-6均低于BDL組。 結(jié)論: (1)NF—κ B的活化上調(diào)了梗阻性黃疸時(shí)炎癥因子的表達(dá),對(duì)NF—κ B活性的調(diào)控可能是改善梗阻性黃疸時(shí)肝臟等器官功能損害的有效治療靶點(diǎn)。 (2)應(yīng)用鈣離子阻滯劑維拉帕米可抑制肝臟NF—κB的表達(dá),減少肝細(xì)胞凋亡,并降低血清
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