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文檔簡介
1、目的:梗阻性黃疸一直是肝膽外科治療的重點與難點,目前對其致肝損傷的機制尚未完全明確。近年來研究表明,梗阻性黃疸時內(nèi)毒素所致免疫性肝損傷是其臨床諸多嚴(yán)重并發(fā)癥的關(guān)鍵原因之一,但其致肝損傷的具體免疫機制仍不十分清楚。CD40/CD40L是T細(xì)胞免疫中最為關(guān)鍵的共刺激信號,在細(xì)胞免疫中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。本研究旨在建立大鼠梗阻性黃疸致肝損傷模型,探討sCD40L在大鼠梗阻性黃疸肝損傷中的表達(dá)水平及其與肝損傷中細(xì)胞免疫相關(guān)分子TNF-ɑ、IL-
2、8表達(dá)的相關(guān)性。
方法:選取SPF級大鼠30只,根據(jù)隨機數(shù)據(jù)表法將其隨機等分為假手術(shù)組(A組),模型對照組(B組)和 CD40L單抗組(C組),每組10只。A組僅予游離出膽總管,然后關(guān)腹,B、C組采用Yoshidome報道的方法結(jié)扎并切斷膽總管,建立梗阻性黃疽模型。其中C組于造模結(jié)束后立即給予腹腔注射CD40LmAb。三組分別與術(shù)后1d、7d、14d三個時間段檢測大鼠外周血中 ALT、AST、TBIL、DBIL水平,及酶聯(lián)免疫
3、吸附試驗(ELISA法)測定TNF-ɑ、IL-8、sCD40L的濃度變化,RT-PCR檢測sCD40LmRNA表達(dá)。實驗結(jié)束時取大鼠肝組織HE染色,觀察三組大鼠肝組織病理學(xué)變化,同時予免疫組織化學(xué)法檢測CD40L在肝組織中的表達(dá)情況。
結(jié)果:與假手術(shù)組(A)比較,模型對照組(B)、抗CD40L單抗組(C)血漿ALT、AST、TBIL、DBIL、TNF-ɑ、IL-8及sCD40L水平均顯著升高(P<0.05),說明梗阻性黃疸后肝
4、細(xì)胞損傷進一步加重。B、C兩組相比, CD40LmAb組大鼠血清ALT、AST、TNF-ɑ、IL-8及sCD40L顯著減低(P<0.05),而 TBIL及 DBIL水平無顯著差異(P>0.05)。血清sCD40L與TNF-ɑ、IL-8相關(guān)關(guān)系。假手術(shù)組:sCD40L與TNF-ɑ的關(guān)系:r=-0.079,P>0.05;sCD40L與IL-8的關(guān)系:r=0.026, P>0.05;模型組sCD40L與TNF-ɑ的關(guān)系:r=0.827,P<0
5、.01; sCD40L與IL-8的關(guān)系:r=0.925,P<0.01;單抗組sCD40L與TNF-ɑ的關(guān)系:r=0.686,P<0.05;sCD40L與IL-8的關(guān)系:r=0.689,P<0.05。病理結(jié)果顯示單抗組肝損傷程度較模型組減輕,免疫組化也證實 CD40L在模型組高表達(dá),而在單抗組表達(dá)下降,假手術(shù)組幾乎不表達(dá)。
結(jié)論:sCD40L、TNF-α和lL-8在大鼠梗阻性黃疸中隨膽道梗阻時間延長及黃疸指數(shù)程度加重,呈逐漸增高
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