纖維細(xì)胞在大鼠多柔比星慢性腎損害模型腎纖維化過(guò)程中的作用以及雷帕霉素對(duì)其的影響.pdf

1、背景與目的：腎纖維化是各種病因所致的慢性腎損傷走向終末期腎臟病(End stage renal disease，ESRD)的共同途徑，以腎小球硬化及腎小管間質(zhì)纖維化為主要病理特征，目前研究證實(shí)其發(fā)生和發(fā)展與成纖維細(xì)胞和肌成纖維細(xì)胞關(guān)系密切，而作為這兩種細(xì)胞的循環(huán)前體細(xì)胞的纖維細(xì)胞(fibrocyte)近來(lái)成為研究焦點(diǎn)。阻斷纖維細(xì)胞趨化、遷移及轉(zhuǎn)分化可能能有效地延緩腎纖維化進(jìn)展。雷帕霉素（rapamycin，RAPA）是一種新型、強(qiáng)效免疫

2、抑制劑，具有較強(qiáng)的抗炎、抗病毒、抗細(xì)胞增殖以及血管保護(hù)作用。研究表明RAPA在多個(gè)動(dòng)物腎病模型中具有明顯的抗腎纖維化作用。本實(shí)驗(yàn)以大鼠多柔比星腎損害模型為研究對(duì)象，觀察纖維細(xì)胞的組織定位以及CCR7、CD45的動(dòng)態(tài)變化，進(jìn)而探討纖維細(xì)胞在腎纖維化的發(fā)生發(fā)展中可能的作用，同時(shí)觀察RAPA干預(yù)治療對(duì)纖維細(xì)胞相關(guān)因子的影響，來(lái)進(jìn)一步探討其抗腎纖維化作用的可能機(jī)制。
　　 方法：通過(guò)兩次給予大鼠尾靜脈注射多柔比星制備多柔比星腎損害大鼠模

3、型。雄性SD 大鼠62只隨機(jī)分為：正常對(duì)照組(A組，n=20)、模型組(B組,n=32)、RAPA治療組(C組,n=10)。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始第1、2周第1天，B、C組分別重復(fù)給予多柔比星（4 mg/kg）尾靜脈注射，對(duì)照組給予等量生理鹽水，自首次注射多柔比星之日起，于第2周末給予C組大鼠RAPA1.5mg/(kg·d)灌胃；A、B組同時(shí)給予等量溶媒。分別于首次注射多柔比星后的第4、7、10、13周末收集A、B組的血、尿及腎組織標(biāo)本，第7周末收集

4、C組的血、尿及腎組織標(biāo)本。全自動(dòng)生化儀測(cè)定血清甘油三脂、總膽固醇和白蛋白；BCA法檢測(cè)24 h尿蛋白排泄率；Masson染色，光鏡下觀察腎臟組織形態(tài)學(xué)變化，并使用腎小球硬化指數(shù)（glomerulosclerosis index，GSI）和腎小管間質(zhì)損傷指數(shù)（tubulointerstitial index,TII）評(píng)估腎臟損害程度；免疫組化觀察纖維細(xì)胞并對(duì)其進(jìn)行組織定位，同時(shí)檢測(cè)CD45、CCR7蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：

5、　　 1.各組大鼠血甘油三酯、總膽固醇及血清白蛋白水平變化 B組與A組相比第7周末，血甘油三酯水平升高(2.57±1.19 vs 0.76±0.11,P＜0.01）、血總膽固醇水平升高（6.79±1.47 vs 1.29±0.27,P＜0.01）顯著升高，血清白蛋白水平明顯降低（21.41±2.11vs 34.64±0.96，P＜0.01）。
　　 2.各組大鼠24 h尿蛋白排泄率的變化 B組與A組相比第7周末，24 h尿蛋白

6、排出率明顯增加（568±102 vs 21±6,P＜0.01），且隨實(shí)驗(yàn)時(shí)間呈逐漸上升趨勢(shì)；C組低于同時(shí)相B組(P＜0.01)。
　　 3.各組大鼠腎臟病理形態(tài)學(xué)改變光鏡下觀察，B組腎小球系膜基質(zhì)明顯增多，腎小管多灶性萎縮和擴(kuò)張，管腔內(nèi)可見(jiàn)蛋白管型，并隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸加重。GSI及TII隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高（P＜0.05）。與B組相比較，C組腎小球的硬化和小管間質(zhì)纖維化均明顯減輕(P＜0.01）。
　　 4.纖維細(xì)胞的觀察

7、B組第7周末大鼠腎組織的連續(xù)切片上檢測(cè)到腎間質(zhì)中出現(xiàn)CD45、Ⅰ型膠原雙陽(yáng)性細(xì)胞，呈圓形、橢圓形或不規(guī)則形態(tài)，多分布于腎皮質(zhì)和皮髓交界區(qū)的血管周?chē)?，腎小球周?chē)湍I小管間質(zhì)中也有少量出現(xiàn)。
　　 5.各組大鼠CD45蛋白表達(dá)的變化免疫組化觀察到，B組腎間質(zhì)中CD45陽(yáng)性細(xì)胞第4周末出現(xiàn)，第7周末數(shù)量達(dá)到頂點(diǎn)，后逐漸減少（P<0.01）。與B組相比，C組中相同時(shí)相CD45陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量顯著降低（P＜0.01）。
　　 6.各組

8、大鼠CCR7蛋白表達(dá)的變化免疫組化觀察到，B組腎間質(zhì)中CCR7陽(yáng)性細(xì)胞在第4周末出現(xiàn)，在第7周數(shù)量達(dá)到頂點(diǎn)，后逐漸減少（P<0.01）。與B組相比，C組中相同時(shí)相CCR7陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量顯著降低（P＜0.01）。
　　 結(jié)論：纖維細(xì)胞可能參與腎纖維化過(guò)程，早中期發(fā)揮作用，其由外周血遷移到組織可能與CCL21/CCR7信號(hào)傳遞通路有關(guān)。RAPA在大鼠慢性腎纖維化進(jìn)展中具有一定的腎保護(hù)作用，可能與降低CCR7蛋白的表達(dá)來(lái)抑制循環(huán)中纖維細(xì)