重組肌肉生長抑制素的制備及主動免疫生長豬的研究.pdf

1、本文通過分子生物學手段獲得了豬MSTN全長DNA片段，構建了克隆載體，并在大腸桿菌中融合表達了豬的MSTN蛋白。利用MSTN蛋白作為抗原，注射免疫生長豬，目的是為了阻斷其生理效應從而提高動物產肉率，同時為今后開展其他外源基因的原核表達研究提供技術支持。 首先，根據基因庫肌肉生長抑制素基因序列設計合成特異性引物，引物兩端分別加上EcoR I和Sal I酶切位點及保護堿基，提取漢普夏豬的骨骼肌總RNA，用RT-PCR方法擴增肌肉生長

2、抑制素全長基因，并將其克隆到pMD18-T載體上，測序后EcoR.I和Sal I雙酶切，克隆到pET-30a中，構建原核表達載體pET-30a-M，將重組表達質粒轉化至E.coli BL21(DE3)中，誘導表達。成功擴增出肌肉生長抑制素全長基因；克隆載體經過DNA序列測定，所得基因與國外報道的完全一致；成功構建原核表達載體pET-30a-M；經IPTG誘導， SDS-PAGE電泳結果證明產物約48ku，與預期大小相符。對表達條件進行優(yōu)

3、化，確定最佳表達條件為IPTG 0.4mmol/L,誘導時間為6h。將菌體進行超聲破碎、SDS。PAGE檢測表明，研究發(fā)現MSTN在大腸桿菌中的表達主要以包涵體的形式存在。采用包涵體純化的方法對蛋白進行粗提純，然后利用重組蛋白6個連續(xù)的組氨酸，采用金屬螯合親和層析純化重組蛋白，得到純化的目的蛋白。 利用獲得的重組肌肉生長抑制素蛋白主動免疫生長育肥豬，考察重組蛋白對生長豬生長性能和肉用品質的影響。試驗選用25+1.5kg健康三元(

4、DLY)雜交豬27頭，按體重相近的原則隨機分成3個處理，每個處理3個重復，每個重復3頭豬，在試驗第1、15、29d分別注射生理鹽水和不同劑量的重組蛋白。試驗第49天每個重復選1頭豬進行屠宰試驗。結果表明：與對照組相比，免疫MSTN蛋白高劑量組、低劑量組豬在生產性能改善方面均呈現出明顯的階段性效應：3-4周低劑量組飼料效率提高，飼料轉化率高于對照組。5-6周低劑量和高劑量組在平均日增重、飼料轉化率都高于對照組。在胴體性狀方面，高劑量組比對