草魚肌肉生長抑制素(MSTN)的cDNA克隆及地塞米松對(duì)其表達(dá)的影響.pdf

1、肌肉生長抑制素(myostatin，MSTN)是轉(zhuǎn)化生長因子—β(transforming growth factor—β，TGF—β)超家族的一員，但又與TGF—β超家族其它成員的同源性很低，故又稱為GDF-8(growthdifferentiation factor-8)，研究證實(shí)其功能是抑制肌肉細(xì)胞的增殖和分化，在哺乳動(dòng)物主要分布于肌肉組織，而在魚類可以分布于各種組織(如肌肉、眼睛、鰓、腦、脾臟、卵巢、肝臟、小腸等)。魚類與哺乳動(dòng)

2、物的不同分布、表達(dá)方式暗示魚類MSTN除了抑制肌肉生長外，可能還影響其它組織如神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育。 本研究以草魚骨骼肌總RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，根據(jù)已知鯉科魚類MSTN cDNA序列，設(shè)計(jì)3對(duì)引物，運(yùn)用了RT—PCR技術(shù)克隆草魚肌肉生長抑制素(MSTN)基因cDNA的全長序列，并對(duì)其核苷酸序列及推導(dǎo)的氨基酸序列以及預(yù)測(cè)的蛋白質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析。同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)還檢測(cè)了注射不同濃度的地塞米松(0μg/kg·d，60μg/kg·

3、d，600μg/kg·d，1200μg/kg·d)以及注射一定濃度(600μg/kg·d)后第1d、第5d、第10d肌肉組織中MSTN表達(dá)水平的變化。研究結(jié)果表明： 1．克隆草魚MSTN cDNA長度1764nt，編碼區(qū)為1178nt，編碼的氨基酸多肽鏈全長375個(gè)氨基酸，符合預(yù)期結(jié)果。同源性分析顯示，鯉科魚類MSTN編碼區(qū)的氨基酸序列具有較高的同源性，其中草魚MSTN與黑頭軟口鰷MSTN之間的同源性最高，氨基酸序列同源性為97

4、.9％;與其他魚類MSTN的氨基酸序列同源性為78.1％～94.4％。而與鳥類、哺乳類之間的序列同源性相比則相對(duì)較低。系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示，不同物種間的MSTN序列同源性基本反映了它們的親緣關(guān)系。分析草魚MSTN蛋白一級(jí)結(jié)構(gòu)、二級(jí)結(jié)構(gòu)、結(jié)構(gòu)域、三級(jí)結(jié)構(gòu)可以看出其蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)以一級(jí)結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)。 2．地塞米松正向調(diào)控草魚MSTN基因表達(dá)。注射不同濃度的地塞米松(0μg/kg·d，60μg/kg·d，600μg/kg·d，1200μg/

5、kg·d)，第5d檢測(cè)草魚肌肉組織MSTN表達(dá)的變化。結(jié)果：0μg/kg·d組，60μg/kg·d組，600μg/kg·d組，1200μg/kg·d組相同體積下目的條帶與β—actin吸光度的相對(duì)比值平均值分別為0.247605，0.247723，0.330207，0.477166。0μg/kg·d組與60μg/kg·d無顯著差異(P＞0.05)，60μg/kg·d組與600μg/kg·d組有顯著差異(P＜0.05)，600μg/kg·