GRK2、SSeCKS在血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)大鼠腎損傷過程中的作用.pdf

1、第一部分、目的：通過藥物緩釋泵向大鼠體內(nèi)持續(xù)釋放AngⅡ，導(dǎo)致蛋白尿的產(chǎn)生，并觀察大鼠腎組織形態(tài)學(xué)改變。
　　 方法：26只體重為150g±5g的SPF級(jí)雄性wistar大鼠，隨機(jī)分為模型組、假手術(shù)組和正常對(duì)照組。10只模型組大鼠背部皮下埋置藥物緩釋泵，通過藥物緩釋泵持續(xù)向大鼠體內(nèi)灌注AngⅡ, 釋放速度為200ng·kg-1·min-1。假手術(shù)組大鼠10只，以生理鹽水代替AngⅡ，其余處理相同。正常對(duì)照組大鼠6只不經(jīng)任何處理。

2、所有大鼠均飼養(yǎng)于代謝籠中, 自由攝取標(biāo)準(zhǔn)飼料及水。在埋入緩釋泵3天后處死各組大鼠,收集各組大鼠處死日當(dāng)天的24h尿液，右心室采血,檢測(cè)血肌酐、尿素氮值。留取大鼠腎皮質(zhì)組織，3％戊二醛固定后進(jìn)行透射電鏡觀察，4％多聚甲醛固定后HE染色觀察腎組織形態(tài)學(xué)改變。
　　 結(jié)果：模型組大鼠24h尿蛋白定量較其他兩組明顯增加，假手術(shù)組大鼠24h尿蛋白定量與正常對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。三組大鼠血肌酐、尿素氮值之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。透射電鏡可見模型組

3、大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞皺縮、剝脫等形態(tài)學(xué)改變。HE染色可見模型組大鼠部分腎組織有輕度炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，腎小球未見明顯異常，其他兩組大鼠腎組織無明顯形態(tài)學(xué)改變。
　　 結(jié)論：AngⅡ通過引起腎小球內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，導(dǎo)致腎小球?yàn)V過屏障受損，從而造成大鼠腎損傷，蛋白尿的產(chǎn)生。
　　 第二部分、目的：檢測(cè)GRK2在AngⅡ誘導(dǎo)大鼠腎損傷后的表達(dá)變化，并觀察GRK2在大鼠腎組織中的定位，探討GRK2在AngⅡ誘導(dǎo)大鼠腎損傷中的作用。<

4、br>　　 方法：取第一部分造模后的各組大鼠腎皮質(zhì)組織，免疫組化方法觀察GRK2在大鼠腎組織中的定位并應(yīng)用IPP圖像分析軟件分析各組大鼠腎組織GRK2染色強(qiáng)度，westernblot方法檢測(cè)各組大鼠腎組織中GRK2蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：免疫組化結(jié)果顯示三組大鼠GRK2主要表達(dá)在腎小管上皮細(xì)胞中，腎小球內(nèi)未見有明顯表達(dá)。Westernblot和免疫組化半定量結(jié)果表明，三組大鼠腎組織均有不同程度的GRK2表達(dá)，模型組大鼠腎

5、組織GRK2的表達(dá)水平顯著增加。
　　 結(jié)論：AngⅡ引起的大鼠腎損傷可導(dǎo)致腎組織GRK2表達(dá)的增加，GRK2可能通過介導(dǎo)血管緊張素Ⅱ受體脫敏，從而參與了AngⅡ誘導(dǎo)的腎臟損傷。
　　 第三部分、目的：觀察大鼠腎組織中SSeCKS的表達(dá)部位，檢測(cè)AngⅡ誘導(dǎo)大鼠腎臟損傷后SSeCKS的表達(dá)變化，探討SSeCKS在AngⅡ誘導(dǎo)大鼠腎臟損傷中的作用。
　　 方法：取第一部分造模后的各組大鼠腎皮質(zhì)組織，免疫熒光方法觀察

6、SSeCKS在大鼠腎組織中的定位，并應(yīng)用IPP軟件分析各組大鼠熒光強(qiáng)度的差異。RT-PCR方法檢測(cè)各組大鼠腎組織中SSeCKS mRNA的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：免疫熒光顯示，SSeCKS主要定位在大鼠腎小球基底膜及部分系膜細(xì)胞區(qū)。RT-PCR及免疫熒光分析結(jié)果顯示模型組大鼠腎組織SSeCKS mRNA的水平較其他兩組升高。
　　 結(jié)論：SSeCKS參與了AngⅡ誘導(dǎo)的腎小球?yàn)V過屏障的損傷過程，其機(jī)制可能為SSeCKS通