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1、研究目的:該研究在細(xì)胞水平觀察免疫抑制劑環(huán)孢素(CsA)對腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)的影響及血管緊張素受體拮抗劑氯沙坦(Losartan)對CsA誘導(dǎo)的細(xì)胞增生及細(xì)胞外基質(zhì)形成的干預(yù)作用,闡明RAS在CsA腎毒性中的作用,為臨床應(yīng)用血管緊張素受體拮抗劑(ARBs)防治CsA腎毒性提供理論依據(jù).研究方法:實驗采用體外培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞株為研究對象,以不同濃度CsA(0,250,500,1000μg/L)孵育細(xì)胞,用放免方法測定細(xì)胞血
2、管緊張素Ⅱ(AngⅡ)的分泌,分別以RT-PCR、免疫組化和流式細(xì)胞術(shù)方法檢測CsA對細(xì)胞表達(dá)血管緊張素1型受體(AT1)的影響;以氚標(biāo)胸腺嘧啶核苷(<'3>H-TdR)摻入法觀察CsA對細(xì)胞增生的影響,以ELISA方法測定不同濃度CsA刺激下細(xì)胞TGFβ1及細(xì)胞外基質(zhì)成分纖維連接蛋白(Fn)的分泌情況,以RT-PCR方法檢測TGFβ1、Ⅰ型膠原、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)mRNA的表達(dá),同時觀察氯沙坦的干預(yù)作用;分別以RT-PCR和
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