白細胞介素-2對前列腺增生上皮細胞增殖、凋亡及旁分泌的影響.pdf

1、第一章前列腺增生上皮細胞中白細胞介素-2及其受體的表達 目的：炎癥與良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia，BPH)關(guān)系密切，BPH組織中浸潤的炎癥細胞可產(chǎn)生大量白細胞介素-2(Interleukin-2，IL-2)，IL-2及其受體在上皮細胞中表達增高，可能在BPH發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。本研究擬探討B(tài)PH組織中IL-2的表達及其與BPH合并炎癥的病理組織學關(guān)系。觀察人良性前列腺增生上皮細胞株

2、BPH-1中白細胞介素-2受體(Interleukin-2 receptor，IL-2R)α、IL-2Rβ和IL-2Rγ的表達。 方法：應用免疫組織化學技術(shù)分別檢測16例單純BPH和42例合并炎癥的BPH組織中IL-2蛋白的表達。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測BPH-1細胞中IL-2Rα、IL-2Rβ和IL-2Rγ基因的表達；采用Western blot檢測IL-2Rα、IL-2Rβ和IL-2Rγ蛋白的表達。

3、 結(jié)果：(1)所有BPH組織均有IL-2蛋白表達，主要位于上皮細胞，在合并炎癥的BPH中的表達顯著高于單純BPH。(2)RT-PCR結(jié)果表明BPH-1細胞表達IL-2Rα、IL-2Rβ和IL-2Rγ基因。(3)Westernblot檢測到BPH-1細胞中IL-2Rα、IL-2Rβ和IL-2Rγ蛋白的表達。 結(jié)論：BPH組織中IL-2表達與浸潤的炎癥細胞有關(guān)。BPH-1細胞表達IL-2Rα、IL-2Rβ和IL-2Rγ，可作為一種

4、較好的模型研究IL-2對BPH的影響。 第二章白細胞介素-2通過ERK1/2信號途徑促進前列腺增生上皮細胞增殖 目的：研究人重組IL-2對BPH-1細胞增殖的作用及其信號轉(zhuǎn)導途徑。 方法：細胞增殖水平用MTT法檢測。p-JNK，JNK，p-p38，p38，p-ERK1/2，ERK1/2用Western blot檢測，聯(lián)合ERK1/2信號轉(zhuǎn)導阻斷劑PD098059，p38信號轉(zhuǎn)導阻斷劑SB203580和JNK信號轉(zhuǎn)

5、導阻斷劑SP600125干預，以探討IL-2對BPH-1細胞增殖的信號轉(zhuǎn)導機制。 結(jié)果：(1)MTT檢測表明IL-2顯著促進BPH-1細胞的增殖，且呈劑量依賴性。(2)IL-2干預誘導BPH-1細胞ERK1/2磷酸化。ERK1/2信號轉(zhuǎn)導阻斷劑PD098059能抑制IL-2促進BPH-1細胞增殖的作用，而p38信號轉(zhuǎn)導阻斷劑SB203580和JNK信號轉(zhuǎn)導阻斷劑SP600125無明顯作用，說明ERK1/2在IL-2促進BPH-1

6、細胞增殖中起關(guān)鍵作用。 結(jié)論：IL-2通過ERK1/2信號轉(zhuǎn)導途徑促進BPH-1細胞增殖。 第三章白細胞介素-2對前列腺增生上皮細胞凋亡及Bcl-2，Bax和Caspase-3蛋白表達的影響 目的：研究IL-2對BPH-1細胞凋亡及凋亡相關(guān)基因(Bcl-2，Bax，Caspase-3)表達的影響，探討IL-2對BPH-1細胞凋亡的作用機制。 方法：細胞凋亡用吖啶橙/溴乙啶染色和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢

7、測。Bcl-2，Bax，Caspase-3蛋白表達用Western blot檢測。 結(jié)果：(1)吖啶橙/溴乙啶染色和ELISA檢測均表明，IL-2抑制BPH-1細胞凋亡，且呈時間及劑量依賴性。(2)IL-2干預可誘導Bcl-2蛋白表達，抑制Bax表達和Caspase-3的裂解活化。 結(jié)論：IL-2抑制BPH-1細胞凋亡與Bcl-2表達上調(diào)、Bax表達下調(diào)以及Caspase-3激活被抑制有關(guān)。 第四章白細胞介素-2通

8、過調(diào)節(jié)前列腺增生上皮細胞的旁分泌抑制前列腺間質(zhì)細胞分化 目的：前列腺間質(zhì)和上皮細胞通過旁分泌和自分泌各種細胞因子相互影響。本研究觀察IL-2對BPH-1細胞TGF-β1基因表達和TGF-β1蛋白分泌的影響，以及有無IL-2刺激的BPH-1條件培養(yǎng)液(conditioned medium，CM)對前列腺間質(zhì)細胞分化的影響。 方法：采用RT-PCR測定BPH-1細胞TGF-β1基因的表達。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測BP

9、H-1CM中TGF-β1水平。Western blot檢測肌球蛋白重鏈(smooth muscle myosin heavy chain，SM-MHC)蛋白在前列腺間質(zhì)細胞中的表達來判斷間質(zhì)細胞的分化。 結(jié)果：(1)IL-2抑制BPH-1細胞TGF-β1基因的表達(2)IL-2抑制BPH-1細胞TGF-β1的分泌。(3)BPH-1CM可促進前列腺間質(zhì)細胞SM-MHC蛋白的表達，TGF-β1中和抗體能抑制該作用，而經(jīng)過IL-2刺激