荔枝核總黃酮對(duì)肝纖維化大鼠肝臟p300-CBP蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:研究荔枝核總黃酮(Total Flavone from Litchi ChinensisSonn，TFL)對(duì)二甲基亞硝胺(Dimethylnitrosamine，DMN)肝纖維化大鼠肝細(xì)胞凋亡機(jī)制TGF-β/Smads信號(hào)通路中p300、CBP和Smad3蛋白表達(dá)的影響及其與肝纖維化程度的相關(guān)性。
　　方法:將SPF級(jí)雄性SD大鼠90只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、肝纖維化模型組、秋水仙堿組、TFL高劑量給藥組(200mg/kg·d

2、)、TFL中劑量給藥組（100mg/kg·d），TFL低劑量給藥組(50mg/kg·d)，每組各15只。以DMN腹腔注射制備大鼠肝纖維化模型，造模同時(shí)分別以秋水仙堿、高、中、低劑量的TFL灌胃進(jìn)行干預(yù)治療，空白對(duì)照組及肝纖維化模型組分別以生理鹽水(5ml/kg)灌胃進(jìn)行對(duì)照。6周后處死大鼠，各組取大鼠肝組織標(biāo)本，HE及Masson染色觀察肝纖維化嚴(yán)重程度，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Smad3 mRNA表達(dá)變化，免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)p300、

3、CBP、Smad3表達(dá)變化，Western blot定量測(cè)定p300、CBP表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　1）病理組織觀察:大鼠肝纖維化造模成功，肝纖維化半定量評(píng)分提示TFL高中低劑量組和秋水仙堿組肝纖維化半定量評(píng)分較模型組低(p＜0.01)，TFL高中劑量組較秋水仙堿組肝纖維化半定量評(píng)分低(p＜0.05)，但TFL低劑量組較與水仙堿組相比，肝纖維化半定量評(píng)分無顯著差別(p＞0.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2)Sma

4、d3測(cè)定:免疫組化結(jié)果顯示模型組Smad3顯色指數(shù)評(píng)分顯著高于空白對(duì)照組(p＜0.01)，TFL高、中、低各組和秋水仙堿組較模型組Smad3表達(dá)均有所減少(p＜0.01);與秋水仙堿組比較，TFL高、中劑量組Smad3表達(dá)較低(p＜0.05); TTL低劑量組Smad3表達(dá)較秋水仙堿稍低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　3)qPCR結(jié)果顯示，模型組Smad3的表達(dá)較空白對(duì)照組明顯升高(p＜0.01）;藥物干預(yù)的TFL高、中

5、、低組和秋水仙堿組Smad3表達(dá)較模型組顯著降低(p＜0.01)，與秋水仙堿組比較，TFL各劑量組Smad3表達(dá)較低(p＜0.05）。
　　4）p300、CBP測(cè)定:免疫組化染色顯示:p300/CBP蛋白主要在肝竇、匯管區(qū)附近細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核中分布，但以分部在細(xì)胞核中為主。相對(duì)于空白對(duì)照組，模型組p300/CBP表達(dá)明顯升高(p＜0.01);與模型組比較，TFL高、中、低劑量組和秋水仙堿組p300/CBP表達(dá)明顯減弱（p＜0.

6、01）;與秋水仙堿組比較，TFL高、中劑量組p300/CBP表達(dá)較低(p＜0.05); TFL低劑量組降低p300/CBP表達(dá)的作用較秋水仙堿組優(yōu)勢(shì)并不明顯。Westernblot結(jié)果顯示，空白對(duì)照組大鼠肝組織中p300/CBP僅少量表達(dá);模型組大鼠肝臟中p300/CBP大量表達(dá)，較空白對(duì)照組明顯升高(p＜0.01)。其余各組表達(dá)與免疫組化結(jié)果基本一致。
　　5）相關(guān)性:肝組織p300、CBP和Smad3蛋白的表達(dá)與肝纖維化程度呈

7、正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為r=0.888，r=0.880, r=0.875(p＜0.01)。
　　結(jié)論:高、中劑量的TFL具有良好的抗肝纖維化作用，其抗肝纖維化作用機(jī)制可能與其抑制p300/CBP、Smad3蛋白表達(dá)，進(jìn)而影響TGF-β/Smads信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)作用，從而促進(jìn)肝星狀細(xì)胞凋亡有關(guān)，且肝纖維化程度與p300/CBP、Smad3蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)。荔枝核總黃酮有望成為有效的中藥單體制劑藥物用于肝纖維化的治療，但仍需要迸一步的研