L-乳酸發(fā)酵菌的選育及發(fā)酵條件的研究.pdf

1、本文根據(jù)L-乳酸菌的特性，從自然界篩選高溫高產(chǎn)L-乳酸的同型乳酸發(fā)酵乳酸菌，對發(fā)酵特性、培養(yǎng)基、發(fā)酵條件進行研究，菌株進行了鑒定，最后通過紫外線對菌株進行誘變，進一步提高菌株的產(chǎn)酸性能。 1.根據(jù)L-乳酸細菌的特性和底物反饋抑制原理，設(shè)計了菌種富集培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基和篩選路線。在夏季廣泛采集樣品，篩選到28株利用葡萄糖為碳源的產(chǎn)L-乳酸的乳酸菌，52℃發(fā)酵48h，L-乳酸產(chǎn)量在60g/L以上。經(jīng)過復(fù)篩及發(fā)酵試驗，確定了1株以葡

2、萄糖為碳源的乳酸菌為研究對象，記為LB-p，L-乳酸的產(chǎn)量達到了90.85g/L發(fā)酵液。測定了此菌株的生長曲線和發(fā)酵液中pH的下降趨勢。篩選結(jié)果證明：在富集培養(yǎng)基和分離培養(yǎng)基中添加L-乳酸鈣濃度在60g/L，分離菌種性能優(yōu)良。 2.對菌株LB-p的發(fā)酵培養(yǎng)基進行了優(yōu)化：通過單因素試驗，研究了不同碳源、氮源種類、生長因子、無機鹽對L-乳酸產(chǎn)量的影響，并在單因素試驗的基礎(chǔ)上，利用響應(yīng)面分析法優(yōu)化了培養(yǎng)基中影響L-乳酸產(chǎn)量的主要因素，

3、得到了大米糖化液(X1)、蛋白胨(X2)、酵母粉(X3)對L-乳酸產(chǎn)量(Y)的回歸方程： Y=90.39+1.17X1+5.36X2+3.10X3-1.48X12-1.92X22-1.55X32+0.66X1*X3-1.39X2*X3根據(jù)響應(yīng)值典型分析求得了大米糖化液(X1)、蛋白胨(X2)、酵母粉(X3)的最佳組合分別為：125.25g/L、8.79g/L和3.58g/L，其對應(yīng)的響應(yīng)值(Y)為94.783g/L。最終確定LB

4、-p的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基：大米糖化液為125.25g/L，蛋白胨8.79g/L，酵母粉3.58g/L，K2HPO43g/L，牛肉膏4g/L，MgSO40.1g/L。L-乳酸的最高產(chǎn)量為94.78g/L發(fā)酵液，對糖的利用率達到95﹪。 3.對菌株LB-p的培養(yǎng)條件進行了優(yōu)化，確定了最佳接種量為8﹪，最佳發(fā)酵溫度為52℃，最佳種齡為16h，發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳裝液量為150ml/250ml搖瓶，L-乳酸的中和劑均采用滅菌的碳酸鈣。

5、4.對該菌株的菌落、菌體形態(tài)特征的觀察，發(fā)酵特性和生理生化特征，確定該菌株為嗜熱乳桿菌(LactobaillustyermophiusLB-p)。 5.利用紫外線對野生菌株LactobaillustyermophiusLB-p進行誘變，利用碳酸鈣平板和梯度L-乳酸鈣培養(yǎng)基平板進行篩選，最終得到一株正向突變株LactobaillustyermophiusLB-p1，最高L-乳酸的產(chǎn)量達到100.42g/L，比出發(fā)菌株提高了5.95