靶向Bcl-2小分子化合物納米懸混液對堿燒傷誘導的大鼠角膜新生血管的抑制作用及其作用機制研究.pdf

1、目的:檢測靶向Bcl-2小分子化合物納米懸混液(Z24-NS)在眼部應用安全性基礎(chǔ)上,觀察Z24-NS對大鼠角膜堿燒傷后角膜新生血管(cornealneovascularization,CNV)增殖的影響,并初步探討其抑制效應及其可能的機制,為將來Z24-NS滴眼液應用于臨床奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.8只SD大鼠隨機分為Z24組和生理鹽水組兩組,每組4只(4眼)。Z24組左眼滴2％的Z24-NS,生理鹽水組左眼滴0

2、.9%的生理鹽水。連續(xù)滴眼14天,通過行為學觀察、裂隙燈顯微鏡檢查、制作病理切片,觀察光鏡下角膜病理學改變,檢測2%Z24-NS滴眼液有無明顯毒副作用。
　　2.36只SD大鼠,采用浸潤1mol/LNaOH的3×3mm濾紙貼附左眼角膜中央40s的方法制作大鼠角膜堿燒傷誘導CNV模型,并隨機分為Z24-NS滴眼液治療組、地塞米松磷酸鈉滴眼液陽性對照組以及空白組三組,每組12只(12眼)。Z24組左眼滴2%的Z24-NS,地米組左眼滴

3、0.1%地塞米松磷酸鈉滴眼液,每日4次,空白組不做任何處理。實驗周期為14天。在堿燒傷后3天、7天、14天通過裂隙燈顯微鏡檢查及照相定性、定量觀察各組的CNV生長情況并計算CNV面積、角膜混濁程度、炎癥反應和前房反應。
　　3.堿燒傷后14天在第二部分的基礎(chǔ)上通過病理組織學觀察及計算機圖像分析系統(tǒng)分析各組角膜情況,檢測各組角膜組織中炎癥細胞的數(shù)量、微血管密度,通過免疫組織化學方法、RT-PCR和WesternBlot檢測大鼠角膜V

4、EGF及其受體Flk-1和Bcl-2的mRNA和蛋白的表達情況。
　　結(jié)果:
　　1.短期局部應用2%的Z24-NS滴眼后大鼠無明顯甩頭、撓抓眼部現(xiàn)象,大鼠無角膜混濁、水腫,角膜上皮無明顯缺損,組織學檢查顯示結(jié)構(gòu)正常,未見炎癥細胞浸潤。
　　2.堿燒傷后3、7、14天Z24組和地塞米松組CNV面積、炎癥指數(shù)及角膜混濁程度均小于空白組(P<0.01或P<0.05)。與地塞米松組比較,2%的Z24-NS抑制CNV程度、炎癥

5、指數(shù)及角膜混濁程度差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　3.堿燒傷后14天Z24組和地塞米松組角膜組織中炎癥細胞的數(shù)量、微血管密度均小于空白組(P<0.01或P<0.05),VEGF、Flk-1及Bcl-2蛋白及mRNA表達明顯低于空白組(P<0.05),而2%的Z24-NS與地塞米松組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。各實驗組VEGF和Flk-1的表達與MVD的數(shù)量呈正相關(guān)(r1=0.9997,P1=0.015;r2=0.

6、9999,P2=0.011)。
　　結(jié)論:
　　1.2%的Z24-NS滴眼液短期局部應用對大鼠的角膜結(jié)構(gòu)無影響,在眼部應用是安全的。
　　2.2%的Z24-NS滴眼液對大鼠角膜堿燒傷后CNV的生長具有明顯抑制作用,同時相應減輕了角膜混濁程度,其抑制CRNV效果與0.1%地塞米松滴眼液相同。
　　3.2%的Z24-NS滴眼液有一定的抗炎作用,它可以抑制大鼠角膜新生血管模型中角膜VEGF、Flk-1及Bcl-2的表達