2-BFI、阿米洛利、咪唑克生減緩小鼠EAE病情作用的比較研究.pdf

1、背景：
　　 自2006年以來，先后有初步的實驗結(jié)果顯示:咪唑啉Ⅱ受體的選擇性配體2-BFI、阿米洛利、咪唑克生均具有減緩實驗性自身免疫性腦脊髓炎（EAE，多發(fā)性硬化的動物模型）病情的作用。但是，在相同的時期內(nèi)，相同的實驗環(huán)境條件下，這三種化合物對EAE病情影響的作用強度如何？目前，尚缺乏“減緩EAE效應(yīng)的比較性研究”的報道。本實驗為此而設(shè)立課題，進(jìn)行如下的實驗研究。
　　 目的：
　　 在相同的時間與實驗環(huán)境條

2、件下下，觀察三種咪唑啉Ⅱ受體(I2R)高選擇性配體:2-BFI(2-(2-benzofuranyl)-2-imidazoline，2-BFI)，阿米洛利(amiloride，AMI)和咪唑克生(idazoxan，IDA)對EAE小鼠的行為學(xué)和病理變化的影響，評價三種配體減緩EAE的生物學(xué)效應(yīng)，比較研究它們之間是否存在藥效作用的強弱程度上的差異。
　　 方法：
　　 6～8周齡C57BL/6雌性小鼠40只，體重15g～18

3、g，按每組8只，將其隨機分為以下5組:(1)—(4)組小鼠均制作經(jīng)典的MOG-EAE模型;用髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白多肽（MOG35-55）和完全弗氏佐劑(complete Freund's adjuvant，CFA)混合抗原乳劑皮下注射法免疫誘導(dǎo)小鼠EAE模型，各組分別腹腔注射不同劑量實驗制劑，每日兩次，連續(xù)14天:(1) EAE-2BFI組:2-BFI，20mg/kg體重/次;(2) EAE-阿米洛利(EAE-AMI)組:阿米洛利，1

4、0 mg/kg體重/次;(3) EAE-咪唑克生(EAE-IDA)組:咪唑克生，20mg/kg體重/次;(4) EAE-生理鹽水(EAE-NS)組:替代注射等容量的生理鹽水/次，作為EAE對照組。(5)空白對照組:不制作EAE模型，但同步分別采用等量生理鹽水替代抗原乳劑皮下注射或替代干預(yù)藥品腹腔注射，作為正常的空白對照組。造模當(dāng)天作為第0天，每天評價及記錄動物行為學(xué)及體重變化，早晚各一次，以便對各組小鼠的日均神經(jīng)功能缺損評分和最高癥狀評

5、分進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，于免疫后第19天處死小鼠，取腰髓，多聚甲醛固定，采用蘇木素-伊紅(HE)染色、LFB髓鞘染色，觀察脊髓的炎癥浸潤程度和脫髓鞘程度。
　　 結(jié)果：
　　 1.小鼠EAE發(fā)病情況及神經(jīng)功能缺損評分空白對照組小鼠活動正常，未出現(xiàn)臨床癥狀;EAE-鹽水組和藥物干預(yù)組小鼠臨床癥狀最早均出現(xiàn)于免疫后第9天，發(fā)病后表現(xiàn)為活動減少、體重減輕、毛色黯淡，以尾巴遠(yuǎn)端肌力下降為首發(fā)癥狀，繼而出現(xiàn)尾部癱瘓，后肢無力、癱瘓，嚴(yán)重

6、者合并前肢癱瘓，甚至瀕死狀態(tài)。EAE-2BFI組，EAE-AMI組，EAE-IDA組的發(fā)病率、潛伏期與EAE-NS組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，但EAE-2BFI組，EAE-AMI組，EAE-IDA組神經(jīng)功能缺損癥狀均明顯較EAE-NS組減輕，最高癥狀評分(p＜0.05)和日均神經(jīng)功能缺損評分較EAE-NS組明顯降低(與EAE-NS組相比，EAE-2BFI組和EAE-AMI組，p＜0.01，EAE-IDA組p＜0.05)，提示這三種配體分別

7、干預(yù)，對EAE的發(fā)病癥狀均有明顯的減緩作用，但三者之間的干預(yù)效應(yīng)強度，卻無區(qū)別，無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 2.腰髓HE染色炎癥細(xì)胞浸潤程度的病理學(xué)改變空白對照組小鼠中樞無炎性細(xì)胞浸潤;EAE-NS組小鼠脊膜周圍和脊髓實質(zhì)內(nèi)有大量炎性細(xì)胞浸潤，以淋巴細(xì)胞為主，有的炎性細(xì)胞圍繞在小血管周圍形成典型的“血管袖套”樣改變，提示EAE發(fā)生后，中樞炎癥反應(yīng)的病理變化十分明顯;與EAE-NS組相比之下，EAE-2BFI組、EAE-AMI組、EAE

8、-IDA組均可見到類同現(xiàn)象:小鼠脊膜周圍僅有少量炎性細(xì)胞浸潤，脊髓實質(zhì)內(nèi)浸潤也減少。3組別的配體干預(yù)對腰髓炎癥細(xì)胞浸潤的病理評分較EAE-NS組均有明顯的降低(分別p＜0.01)，提示該三種配體對EAE發(fā)病中樞炎癥細(xì)胞浸潤均有明顯的減緩作用，而三個干預(yù)組之間的效應(yīng)強度亦無明顯的差異(p＞0.05)。
　　 3.腰髓LFB染色髓鞘脫失的病理學(xué)改變空白對照組小鼠的腰髓神經(jīng)髓鞘稠密，未見脫失變化;EAE-NS組可見嚴(yán)重而廣泛的髓鞘脫失

9、，而配體干預(yù)3組別EAE的神經(jīng)髓鞘脫失程度也都明顯減輕(p＜0.01)，提示該三種配體對EAE發(fā)病中樞髓鞘脫失均有明顯的減緩作用，但三個干預(yù)組之間的效應(yīng)強度無明顯差異(p＞0.05)。這些腰髓LFB髓鞘染色的病理變化觀察結(jié)果與HE炎癥細(xì)胞浸潤染色的病理變化觀察結(jié)果相一致。
　　 結(jié)論：
　　 1. 2-BFI、阿米洛利和咪唑克生分別的慢性干預(yù)，對EAE的發(fā)生未能顯示有明顯的影響，因為干預(yù)后EAE小鼠的發(fā)病率和潛伏期沒有改

10、變;但是對EAE的病情（癥狀嚴(yán)重度）均有明顯的減緩作用，即能夠明顯降低EAE的最高癥狀評分和日均神經(jīng)功能缺損評分。
　　 2. 2-BFI、阿米洛利和咪唑克生的干預(yù)均能夠緩解EAE小鼠脊髓病理損傷。三種配體各自干預(yù)，均能明顯減緩EAE中樞炎癥病理變化:神經(jīng)組織的炎癥細(xì)胞浸潤與髓鞘脫失，與減緩神經(jīng)癥狀的作用相一致，均顯示具有較強的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　 3. 2-BFI、阿米洛利和咪唑克生分別干預(yù)，對EAE都有明顯的保護(hù)作用