脾氣虛證大鼠小腸神經(jīng)、Cajal間質(zhì)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化和針刺足三里、天樞穴修復(fù)作用實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景:脾氣虛證(syndrome of deficiency of spleen-qi，SDSQ)主要癥狀有納少，腹脹，便溏等，表現(xiàn)為胃腸運(yùn)動功能障礙。改善胃腸動力有效地恢復(fù)消化道吸收、內(nèi)分泌和免疫等功能，可有效防治脾氣虛證。Cajal間質(zhì)細(xì)胞(interstitial cells of Cajal，ICC)參與胃腸運(yùn)動調(diào)控，彼此連接形成網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)，廣泛分布在胃腸道肌層，是介于腸神經(jīng)系統(tǒng)(enteric nervous system，E

2、NS)與平滑肌細(xì)胞(smooth muscle cell，SMC)之間的一類特殊細(xì)胞。腸神經(jīng)釋放遞質(zhì)作用于ICC，經(jīng)過ICC的信息加工，傳遞給平滑肌，引起胃腸運(yùn)動。ENS、ICC和SMC三者相互聯(lián)系，參與胃腸運(yùn)動的調(diào)節(jié)。同時，臨床和動物實(shí)驗(yàn)研究都表明針刺足三里和天樞穴可糾正胃腸運(yùn)動功能紊亂，從而有效治療脾氣虛證。
　　目的:以脾氣虛大鼠模型為實(shí)驗(yàn)對象，應(yīng)用共聚焦顯微鏡和透射電鏡，觀察脾氣虛大鼠小腸ENS、ICC和SMC的形態(tài)學(xué)變化

3、以及針刺足三里穴和天樞穴修復(fù)作用的影響，探討脾氣虛證致胃腸運(yùn)動障礙的產(chǎn)生機(jī)制及針刺足三里穴和天樞穴治療脾氣虛證的機(jī)理。
　　方法:選取清潔級成年Wistar大鼠60只，體重180g-220g，雌雄各半，隨機(jī)分組:
　?、僬φ战M（10只）;
　　②脾氣虛證組（10只）;
　?、圩匀换謴?fù)組（10只）;
　?、茚槾套闳镅ㄖ委熃M（10只）;
　?、葆槾烫鞓醒ㄖ委熃M（10只）;
　?、掎槾套闳?天

4、樞穴治療組（10只）。
　　正常對照組每只大鼠按照脾氣虛證組灌服等量生理鹽水，飲食不限。脾氣虛證大鼠動物模型建立依據(jù)陳小野的方法。針刺“足三里”和“天樞”。取各組大鼠上段小腸組織用于激光掃描共聚焦顯微鏡檢測。制作標(biāo)本用于透射電鏡觀測。
　　結(jié)果:
　　1、胃腸大體形態(tài)觀察:
　　正常對照組:胃腸蠕動良好，腸管色澤紅潤，無擴(kuò)張、水腫，形態(tài)完好。脾氣虛證組:腸管呈暗紅色，漿膜充血、水腫，胃腸蠕動波少見，針刺足三里穴治

5、療組、針刺天樞穴治療組以及針刺足三里+天樞穴治療組針灸治療后，腸管呈紅色，腸蠕動基本正常，粘膜水腫基本減退。
　　2、免疫熒光共聚焦顯微鏡檢測
　　(1)腸神經(jīng):正常對照組大鼠小腸PGP9.5、ACh、SP、VIP和NO神經(jīng)纖維相互間的連接正常，形成完整的網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)。脾氣虛證組大鼠與正常對照組相比，PGP9.5、ACh、SP、VIP和NO神經(jīng)纖維數(shù)量均明顯減少(P＜0.05)，熒光IOD值明顯下降(P＜0.05)。自然恢復(fù)組

6、大鼠較之正常對照組，小腸PGP9.5、ACh、SP、VIP和NO神經(jīng)纖維數(shù)量減少（P＜0.05），熒光IOD值下降(P＜0.05)，與脾氣虛證組無差異。針刺足三里穴治療組、針刺天樞穴治療組以及針刺足三里+天樞穴治療組較之脾氣虛證組和自然恢復(fù)組，小腸PGP9.5、ACh、SP、VIP和NO神經(jīng)纖維數(shù)量明顯增多(P＜0.05)，細(xì)胞熒光IOD值明顯上升(P＜0.05)，與正常對照組無明顯差異，各針灸組之間無明顯差異。
　　(2)ICC

7、網(wǎng)絡(luò):正常對照組大鼠小腸ICC相互間連接完好，ICC網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)正常。造模成功后，脾氣虛證組與正常對照組相比，ICC數(shù)量明顯減少，熒光IOD值均明顯下降(P＜0.05)，ICC網(wǎng)絡(luò)明顯受到破壞。自然恢復(fù)組較之正常對照組，小腸ICC數(shù)量減少，熒光IOD值均明顯下降（P＜0.05），ICC網(wǎng)絡(luò)受損，較之脾氣虛證組無明顯差別。針刺足三里穴治療組、針刺天樞穴治療組以及針刺足三里+天樞穴治療組較之于脾氣虛證組和自然恢復(fù)組，ICC數(shù)量明顯增加，熒光IO

8、D值均明顯上升(P＜0.05)，ICC網(wǎng)絡(luò)基本保持完整，與正常對照組無明顯差異，各針灸組之間無明顯差異。
　　(3)SMC:正常對照組SMC結(jié)構(gòu)正常。造模成功后，脾氣虛證組與正常對照組相比，SMC熒光IOD值均明顯下降(P＜0.05)，SMC結(jié)構(gòu)明顯受到破壞。自然恢復(fù)組較之正常對照組，小腸SMC熒光IOD值均明顯下降(P＜0.05)，SMC結(jié)構(gòu)受損，較之脾氣虛證組無明顯差別。針刺足三里穴治療組、針刺天樞穴治療組以及針刺足三里+天樞

9、穴治療組較之于脾氣虛證組和自然恢復(fù)組，SMC熒光IOD值均明顯上升(P＜0.05)，SMC結(jié)構(gòu)基本保持正常，與正常對照組無明顯差異，各針灸組之間無差別。
　　3、透射電鏡觀測
　　ICC超微結(jié)構(gòu):正常對照組ICC體積小，多呈星形或梭形，細(xì)胞核較大，細(xì)胞質(zhì)少，含有豐富的細(xì)胞器。脾氣虛證組ICC減少，胞漿內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量明顯減少，細(xì)胞質(zhì)電子密度不均，細(xì)胞核皺縮。細(xì)胞結(jié)構(gòu)明顯受損。自然恢復(fù)組ICC胞漿內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量較正常對照組減少，細(xì)胞

10、核電子密度不勻，形態(tài)結(jié)構(gòu)紊亂。針刺足三里穴治療組、針刺天樞穴治療組以及針刺足三里+天樞穴治療組ICC胞漿內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量較多，形態(tài)結(jié)構(gòu)較為清楚，細(xì)胞核基本正常。
　　結(jié)論:(1)脾氣虛時，大鼠小腸充血水腫，小腸動力功能障礙;針刺足三里穴及天樞穴治療能夠顯著減輕小腸充血水腫，改善小腸功能。
　　(2)脾氣虛時，小腸PGP9.5、ACh、SP、VIP和NO神經(jīng)纖維數(shù)量明顯減少，腸神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重;針刺足三里穴及天樞穴能夠減輕腸神