動脈粥樣硬化斑塊中巨噬細胞和平滑肌細胞分布的實驗研究.pdf

1、動脈粥樣硬化斑塊破裂是引起急性心腦血管事件的主要原因，因此確定易損斑塊對于預防急性心腦血管事件的發(fā)生具有重要意義。隨著各種醫(yī)學影像學技術的發(fā)展，使用非侵入性影像學方法診斷動脈粥樣硬化斑塊已經(jīng)實現(xiàn)，然而，如何早期預測動脈粥樣硬化患者發(fā)生急性心腦血管事件成為目前需要解決的問題。動脈粥樣硬化分子影像學研究的開展，是目前心腦血管疾病防治的重要研究內(nèi)容。本實驗擬通過高脂飼養(yǎng)結合頸總動脈外置套管的方法建立ApoE-/-小鼠頸動脈粥樣硬化模型，應用7

2、.0T MRI對動脈粥樣硬化斑塊進行評價，并通過病理學方法檢測粥樣硬化斑塊中巨噬細胞和血管平滑肌細胞的分布，為進一步開展分子影像學研究奠定一定的實驗基礎。本實驗分為以下三個部分:
　　第一部分ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化斑塊形成特點及磁共振成像的實驗研究
　　目的:建立載脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠頸動脈粥樣硬化模型，并應用7.0T MRI對動脈粥樣硬化斑塊進行評價。
　　材料與方法:通過高脂飼養(yǎng)以及在左側

3、頸總動脈外置套管的方法建立實驗組ApoE-/-小鼠和對照組野生型C57小鼠頸動脈粥樣硬化模型(n=6)，8周后對兩組小鼠行MR掃描。掃描完成后取血測定血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)，并取損傷側頸動脈行HE染色觀察病理學變化，并對有斑塊形成的血管行Oil Red O染色觀察斑塊內(nèi)脂質(zhì)成分的分布。
　　結果:實驗組小鼠在建模8周后MRI表現(xiàn)為損傷側血管壁信號增高、管腔不規(guī)則狹窄，

4、相應的組織病理學檢查顯示損傷側動脈管腔狹窄，其內(nèi)可見粥樣斑塊形成;而對照組小鼠在建模8周后MRI表現(xiàn)僅見2例血管壁信號增高、管腔狹窄，相應的組織病理學檢查顯示損傷側動脈管壁增厚，未見粥樣斑塊形成。實驗組小鼠血清TC和LDL值明顯升高（t值分別為9.99和9.12，P值均＜0.01），TG和HDL值無明顯變化（t值分別為-1.71和-1.05，P值＞0.05）。
　　結論:高脂飼養(yǎng)結合頸總動脈外置套管的方法可以快速建立ApoE-/-

5、小鼠動脈粥樣硬化模型，應用7.0T MRI可成功對動脈粥樣硬化斑塊進行評價。
　　第二部分 USPIO MR成像檢測ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化斑塊的實驗研究
　　目的:探討USPIO MR成像檢測ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化斑塊的可行性，為早期發(fā)現(xiàn)粥樣硬化易損斑塊提供實驗依據(jù)。
　　方法:通過高脂飼養(yǎng)以及在左側頸總動脈外置套管的方法建立實驗組ApoE-/-小鼠和對照組野生型C57小鼠頸動脈粥樣硬化模型(n=6)，

6、8周后行頸部MRI平掃以及經(jīng)尾靜脈注入USPIO(0.25 mmolFe/kg)48 h后MRI掃描，掃描完成后取損傷側頸動脈標本行普魯士藍染色和CD68、α-SMA免疫熒光染色。
　　結果:ApoE-/-小鼠尾靜脈注入USPIO48 h后，在T2WI上損傷側頸動脈血管腔內(nèi)斑塊信號較注射前減低，注射前后相對信號強度分別為1.00±0.24和0.73±0.21，信號強度減低(28.01±9.20)％，t=7.78，P值＜0.01，差

7、異有統(tǒng)計學意義，病理組織學檢測顯示斑塊內(nèi)有鐵顆粒沉積，且與斑塊內(nèi)巨噬細胞分布基本一致。C57小鼠注射前后相對信號強度分別為1.12±0.18和1.09±0.24，信號強度減低(-6.58±23.19)％，t=0.71，P值＞0.05，差異無統(tǒng)計學意義，病理組織學檢測顯示僅2例血管壁增厚，沒有鐵顆粒沉積。
　　結論:USPIO可作為MRI示蹤劑以巨噬細胞作為靶細胞在體檢測動脈粥樣硬化斑塊。
　　第三部分 ApoE-/-小鼠頸動

8、脈粥樣硬化斑塊中巨噬細胞和平滑肌細胞分布的實驗研究
　　目的:檢測巨噬細胞和血管平滑肌細胞在ApoE-/-小鼠頸動脈粥樣硬化斑塊形成過程中分布的動態(tài)變化。
　　材料和方法:12只雄性ApoE-/-小鼠，隨機分為3組，每組4只，通過高脂飼養(yǎng)以及在左側頸總動脈外置套管的方法建立頸動脈粥樣硬化模型，分別于建模后2周、4周和6周時處死動物，取損傷側頸動脈，采用免疫組織化學方法觀察斑塊中巨噬細胞和平滑肌細胞分布的動態(tài)變化。