SPHSG抑制大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討增殖抑制基因（hyperplasia suppressor gene，HSG）的有效功能片段合成的多肽SPHSG抑制大鼠血管平滑肌細(xì)胞（Vascular smooth muscle cell，VSMC）增殖的作用及其相關(guān)分子機(jī)制。
　　方法：人工合成多肽MRSP，其為HSG的p21ras特性結(jié)構(gòu)域的N端加TAT穿膜序列后合成的多肽。已研究證實(shí)MRSP具有誘導(dǎo)VSMC凋亡和抑制其增殖的作用。SPHSG是在MRSP基礎(chǔ)上去掉

2、了3個(gè)氨基酸后合成的多肽，NC是無效對照肽，其與SPHSG具有相同的氨基酸個(gè)數(shù)。本研究以Control組為空白對照，NC組為無效對照，鈣調(diào)蛋白結(jié)合序列（CBS）和雷帕霉素（Rapamycin）為陽性對照，分別采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法、水溶性四氮唑鹽法（CCK-8）及流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期法比較SPHSG和MRSP抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖的效果，并采用蛋白免疫印跡法（Western Blot）探討SPHSG抑制VSMC增殖作用的分子機(jī)制。
　　

3、結(jié)果：細(xì)胞計(jì)數(shù)和CCK-8結(jié)果均顯示,與Control組和NC組相比，SPHSG組和MRSP組具有顯著抑制VSMC增殖的作用，且抑制作用呈時(shí)間依賴性（P﹤0.05），SPHSG組比MRSP組抑制效果更顯著（P﹤0.05），與CBS組和雷帕霉素組抑制效果相當(dāng)（P﹥0.05）。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期結(jié)果顯示，與Control組和NC組相比，SPHSG組和MRSP組均能使VSMC生長停滯于細(xì)胞周期的G0/G1期，進(jìn)入S期的細(xì)胞明顯減少（P﹤0

4、.05），與CBS組和雷帕霉素組效果相當(dāng)（P﹥0.05）。Western Blot結(jié)果表明，與Control組和NC組相比，SPHSG組顯著降低VSMC中磷酸化ERK1/2蛋白的表達(dá)水平，效果比MRSP組更明顯（P﹤0.05）。
　　結(jié)論：HSG基因有效功能片段合成肽SPHSG具有顯著抑制大鼠VSMC增殖的作用，且抑制增殖作用效果較MRSP更強(qiáng)，其分子機(jī)制與抑制Ras-Raf-ERK信號傳導(dǎo)通路中ERK1/2蛋白的磷酸化表達(dá)水平有