Lycorine上調(diào)p53非依賴(lài)的p21轉(zhuǎn)錄機(jī)制的研究.pdf

1、白血病是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的造血組織惡性疾病,目前化學(xué)治療仍是白血病治療的主要途徑。Lycorine(石蒜堿)是從我國(guó)廣泛分布的多年生草本植物石蒜鱗莖中分離出的一種單體化合物,屬于異喹啉類(lèi)(isoquinoline)生物堿,具有廣譜的抗白血病作用。本研究以人急性早幼粒白血病細(xì)胞株HL-60和人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株K562作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,研究lycorine在白血病細(xì)胞中上調(diào)p53非依賴(lài)的p21轉(zhuǎn)錄過(guò)程中相關(guān)蛋白表達(dá)的變化,以及l(fā)ycori

2、ne對(duì)p21轉(zhuǎn)錄的靶向特異性,進(jìn)一步闡明lycorine對(duì)白血病p53非依賴(lài)的p21轉(zhuǎn)錄的分子機(jī)制。
　　 本課題用不同濃度的lycorine作用HL-60細(xì)胞和K562細(xì)胞24h后,提取總蛋白,通過(guò)Western blotting檢測(cè)lycorine作用后p53蛋白的表達(dá)變化及調(diào)控p21轉(zhuǎn)錄相關(guān)蛋白:E2F、Rb、c-myc、HDAC1、HDAC3的表達(dá)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在p53野生型的K562細(xì)胞中,lycorine上調(diào)p21

3、的表達(dá)不是通過(guò)上調(diào)p53來(lái)實(shí)現(xiàn)的,表明lycorine對(duì)p21的調(diào)控是p53非依賴(lài)的;隨著lycorine藥物作用濃度的逐漸增大,HL-60細(xì)胞和K562細(xì)胞中E2F和Rb蛋白表達(dá)量上調(diào),c-myc蛋白表達(dá)量下調(diào),而HDAC1和HDAC3蛋白表達(dá)量沒(méi)有明顯差異,表明Rb/E2F途徑及c-myc途徑參與了p21的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,HDACs途徑不參與p21的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。另外,為檢測(cè)p21靶標(biāo)的特異性,以p21 Si RNA封閉p21基因的表達(dá)后,用