p53非依賴性信號(hào)通路在MMS致細(xì)胞凋亡中的機(jī)制研究.pdf

1、MMS，又名甲磺酸甲酯，是一種典型的甲基化試劑。MMS作為重要的治療癌癥的化療藥物，能夠?qū)е录?xì)胞發(fā)生DNA雙鏈斷裂(DSB)。DNA雙鏈斷裂的形成是許多抗癌藥物發(fā)揮藥效的重要標(biāo)志。目前眾多研究證明，MMS能夠誘導(dǎo)不同細(xì)胞株中p53依賴性信號(hào)通路介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的發(fā)生。然而，當(dāng)p53基因敲除時(shí)，細(xì)胞仍然表現(xiàn)出對(duì)MMS藥物相似的敏感性，從而證明在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過(guò)程中p53非依賴性信號(hào)通路的存在。
　　 為了進(jìn)一步研究MMS誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡

2、中p53非依賴性信號(hào)通路的具體機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)建立了MMS誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。?shí)驗(yàn)選取了2種細(xì)胞株，分別為p53基因缺失的H1299細(xì)胞和Hep3B細(xì)胞。并確定了MMS染毒的5種濃度，分別為50μM、100μM、200μM、400μM和800μM。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，在MMS染毒時(shí)間為12h，染毒濃度為50μM、100μM、200μM、400μM和800μM時(shí)，兩種細(xì)胞株中均出現(xiàn)γH2AX焦點(diǎn)，即細(xì)胞發(fā)生不同程度的DNA損傷。在MMS染毒時(shí)間

3、為12h，染毒濃度為400μM和800μM時(shí)，兩種細(xì)胞株均發(fā)生細(xì)胞凋亡。這一細(xì)胞凋亡的過(guò)程涉及到線粒體膜通透性的降低，Caspase2蛋白從細(xì)胞核到細(xì)胞質(zhì)的轉(zhuǎn)移，細(xì)胞色素C的釋放，以及Caspase9的剪切激活等。然而，MMS誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡不能夠激活p53家族成員TAp73以及DNp73的參與。綜上所述，MMS誘導(dǎo)的這兩種細(xì)胞凋亡為p53非依賴性以及p73非依賴性的信號(hào)通路介導(dǎo)的，而凋亡的發(fā)生與Caspase2從細(xì)胞核到細(xì)胞質(zhì)的轉(zhuǎn)移激活