沙苑子黃酮抗大鼠酒精性肝纖維化作用及其機制研究.pdf

1、目的:研究沙苑子黃酮(FAC)抗酒精性肝纖維化的作用以及其作用機制。
　　方法:(1)以酒精灌胃的方式建立大鼠酒精性肝纖維化模型,分別給予不同濃度的FAC(30mg/kg、60mg/kg、120mg/kg),以扶正化瘀膠囊(FZHY)作為陽性對照藥。通過 HE,Masson染色觀察其病理改變;檢測血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、透明質(zhì)酸(HA)、層粘連蛋白(LN)、Ⅰ型前膠原蛋白(PC-Ⅰ)、Ⅲ型前膠原蛋白(PC

2、-Ⅲ)、Ⅳ型前膠原蛋白(PC-Ⅳ)、和轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)含量;堿水解法檢測肝組織中羥脯氨酸(Hyp)的含量;Western blot檢測肝臟組織中α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的表達。(2)建立大鼠肝星狀細胞(HSCs-T6)活化的體外模型。對酒精刺激人正常肝細胞(7702)條件培養(yǎng)液、脂多糖(LPS)刺激巨噬細胞(RAW)條件培養(yǎng)液、TGF-β1、血小板衍生生長因子(PDGF)四種模型進行條件優(yōu)化篩選。在所選模型條件下

3、,考察不同濃度FAC(終濃度25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)對活化狀態(tài)下HSCs-T6增殖的影響;對HA、LN、PC-Ⅲ合成的影響;對TGF-β1細胞因子分泌的影響;對TGF-β1信號傳導(dǎo)通路中Smad3、Phospho-Smad3、Smad7蛋白分子表達的影響。
　　結(jié)果:(1)在大鼠酒精性肝纖維化模型中,FAC可顯著降低血清中ALT、AST、HA、LN、PC-Ⅰ、PC-Ⅲ、PC-Ⅳ、TGF-β1的含量(P<0

4、.01),減少肝臟組織中Hyp以及α-SMA的表達(P<0.01)。(2)在7702條件培養(yǎng)液模型、RAW條件培養(yǎng)液模型、TGF-β1模型、PDGF模型四種HSCs-T6活化的體外模型中,本實驗分別選擇正常培養(yǎng)液:7702條件培養(yǎng)液(9:1、24h),正常培養(yǎng)液:RAW條件培養(yǎng)液(9:1、24h),2ng/ml、48h,10ng/ml、48h為刺激條件。正常情況下,FAC對靜止狀態(tài)的HSCs-T6的增殖無明顯影響,但在四個模型中,FAC