臺灣線蟲草子實體的人工誘導(dǎo)優(yōu)化培養(yǎng)及部分化學(xué)成分分析.pdf

1、臺灣線蟲草（Ophiocordyceps formosana Kobayasi& Shimizu）是寄生于鞘翅目幼蟲擬步甲上的一種蟲草，其子實體具有顯著的抗腫瘤活性，但是子實體形成的遺傳背景及主要的化學(xué)成分氨基酸和活性化合物核苷類成分并不清楚。本文在分析臺灣線蟲草的無性型黃山被毛孢（Hirsutella huangshanensis）交配型基因的基礎(chǔ)上，對子實體的人工誘導(dǎo)優(yōu)化培養(yǎng)工藝及部分化學(xué)成分進(jìn)行了研究，主要內(nèi)容包括:選用實驗室保存

2、的34株單次生子囊孢子菌株，運用PCR擴增技術(shù)對其交配型類型進(jìn)行驗證，并對不同交配型基因菌株分別進(jìn)行SDAY平板培養(yǎng)和蟲專大米培養(yǎng)基子實體人工培養(yǎng)，記錄其生長差異，篩選出子實體栽培最優(yōu)菌株;同時選用子實體栽培最優(yōu)菌株進(jìn)行子實體培養(yǎng)優(yōu)化實驗，獲得臺灣線蟲草最佳培養(yǎng)工藝;并利用氨基酸分析儀和高效液相色譜儀對其3種人工培養(yǎng)物的氨基酸和核苷類含量進(jìn)行分析比較。結(jié)果為將來臺灣線蟲草的大規(guī)模人工栽培和應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。
　　PCR擴增結(jié)果顯

3、示:34株單次生子囊孢子菌株中有16株同時含有MAT1-1和MAT1-2兩種類型的交配型基因，14株只含有MAT1-1基因，4株只含有MAT1-2基因。不同交配型菌株人工培養(yǎng)結(jié)果表明，同時含有兩種交配型基因的菌株的菌落生長直徑(7.00mm)和子實體形成概率(81.25％)以及子實體產(chǎn)量（1.62 g·瓶-1）均明顯高于只含有一種交配型基因的菌株。綜上所述，同時含有兩種交配型基因的菌株在無性階段和有性階段的生長狀況均優(yōu)于只含有一種交配型

4、基因的菌株，更適合進(jìn)行子實體人工培養(yǎng)實驗研究。
　　子實體人工培養(yǎng)最佳工藝的確定:選用子實體栽培最優(yōu)菌種FCC15，以大米為子實體栽培基質(zhì)，子實體栽培營養(yǎng)液(C)作為栽培營養(yǎng)液，按每瓶20g大米、40mL營養(yǎng)液的量配制栽培培養(yǎng)基;液體搖瓶種子液接種量為10mL/瓶，接種后置于25℃人工培養(yǎng)箱中，菌絲體生長前期完全避光，菌絲鋪滿后（約20～30d）給予200～400lux連續(xù)光照，待子實體生長健壯至幾乎不再生長時采收。
　　3

5、種人工培養(yǎng)物—搖瓶菌絲體、深層發(fā)酵菌絲體和子實體中氨基酸和核苷類含量比較結(jié)果表明，搖瓶菌絲體中的氨基酸總量和必需氨基酸總量含量最高，分別為33.23g/100g和10.97g/100g，其次是深層發(fā)酵菌絲體，其含量分別為25.28 g/100g和8.42g/100g，子實體中含量最低，分別為23.87 g/100g和7.98g/100g;搖瓶菌絲體中腺苷、鳥苷、尿苷和胞苷以及次黃嘌呤、胞嘧啶的含量最高，分別為0.56 mg/g,0.19