蛹蟲草子實體分化及生長特性的研究.pdf

1、蛹蟲草屬于子囊菌綱中的蟲草屬真菌，具有和冬蟲夏草相似的藥理作用。由于蛹蟲草菌生長條件不很嚴(yán)格，可以在多種人工培養(yǎng)基上發(fā)育出子實體，所以，對蛹蟲草的開發(fā)研究成為近年來的熱點問題。大多數(shù)研究主要集中在栽培技術(shù)和生物活性成分方面，對于蛹蟲草菌絲生長、子實體分化發(fā)育的特征特性及其規(guī)律，目前還不十分清楚。在實際栽培時不能有效地控制其分化發(fā)育條件，菌種質(zhì)量以及菌絲生長會出現(xiàn)很大差異，導(dǎo)致子實體分化發(fā)育不整齊，甚至不能出草，造成嚴(yán)重?fù)p失。本文以實驗室

2、保藏的九株蛹蟲草菌為研究對象，首先通過拮抗試驗、酯酶同工酶分析以及培養(yǎng)觀察篩選出優(yōu)良菌株；再采取單因素及正交試驗優(yōu)化蛹蟲草的液體及固體培養(yǎng)條件，測定不同生長階段培養(yǎng)基質(zhì)中主要酶活性變化；最后對蛹蟲草子實體分化及生長過程的生理特性及形態(tài)變化進(jìn)行了總結(jié)。主要結(jié)果如下：
　　?對九株蛹蟲草菌進(jìn)行拮抗試驗，結(jié)果顯示C1、C2、C9之間無拮抗現(xiàn)象，菌絲生長融為一體呈灰白色稀疏絨毛狀；C3、C4、C5、C6、C7之間無拮抗現(xiàn)象，菌絲呈白色圓環(huán)

3、匍匐狀；C8與其他各菌都有拮抗現(xiàn)象，菌絲呈乳白色絨毛狀。酯酶同工酶分析結(jié)果顯示，六株蛹蟲草菌在酶譜中各檢測到一條酶帶，其中C4、C3、C7、C8、C5、C2遷移率分別為0.41，0.45，0.47，0，0.46，0.36；說明C3，C4，C5，C7有親緣關(guān)系，C2與C8跟它們沒有親緣性。各菌株進(jìn)行子實體形態(tài)觀察試驗得出，C6的子實體生長旺盛，呈橙黃色，產(chǎn)量達(dá)8.7g/瓶；C2、C8只是菌絲生長而且菌絲色澤和長勢都較差，見光后不轉(zhuǎn)色，不長

4、子實體。在此條件下菌絲體干重分別達(dá)3.7g/L，3.9g/L。子實體形態(tài)觀察與拮抗試驗，酯酶同工酶分析結(jié)果基本一致。綜合得出九種蛹蟲草菌分為三類，分別為C1、C2、C9為一類，C3、C4、C5、C6、C7為一類，C8為一類。
　　?以 C6為出發(fā)菌株，篩選出適合菌絲生長的斜面培養(yǎng)基碳氮源為葡萄糖和蛋白胨，液體培養(yǎng)基碳氮源為蔗糖和蛋白胨，各種因素對菌絲干重影響的顯著性依次為氮源>菌種種類>碳源；溫度>初始pH值>搖床轉(zhuǎn)速。比較不同的

5、液體培養(yǎng)基配方，得到適合菌絲生長的的液體培養(yǎng)基配方為1L水中含馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨3g，磷酸二氫鉀0.5g，硫酸鎂0.2g， VB110mg。
　　?對子實體培養(yǎng)的培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，篩選出有利于子實體生長的最優(yōu)培養(yǎng)基組成為培養(yǎng)料小麥40g，營養(yǎng)液60mL，其中營養(yǎng)液包括：1L水中添加蔗糖20g，蛋白胨5g，磷酸二氫鉀0.5g，硫酸鎂0.2g，VB110mg，蠶蛹粉0.5g。適宜的生長條件為，溫度22℃，空氣濕度80％

6、，光照強度200lux，在此條件下蛹蟲草菌絲轉(zhuǎn)色快，子實體生長健壯，顏色鮮艷橙黃，生物學(xué)產(chǎn)量高。
　　?測定蛹蟲草不同生長階段中培養(yǎng)基的主要酶活及總糖、還原糖、游離氨基酸含量的變化，結(jié)果表明，羧甲基纖維素酶、淀粉酶、酸性蛋白酶在菌絲生長時期酶活性較低分別為1.14U、2.6、5.6U；在子實體生長期酶活性最高，分別為10.71U、8.4U、44.8U。隨著子實體生長，基質(zhì)中總糖、還原糖及游離氨基酸含量處于先升高后又下降的趨勢。在菌

7、絲生長期分別為
　　0.347 mg/g、0.131 mg/g、3.2 mg/g，在子實體生長期分別為0.671mg/g、0.427mg/g、5.6mg/g。
　　?蛹蟲草從接種到子實體成熟經(jīng)過菌種萌發(fā)期、菌絲擴(kuò)展期、菌絲轉(zhuǎn)色期、原基分化期、子座形成期、子實體分化期、子囊和子囊孢子發(fā)育期、子實體成熟期這幾個時期。從營養(yǎng)生長再進(jìn)入生殖生長直至成熟，整個過程大約需要50~60天。菌種萌發(fā)一般需要一周左右，菌絲呈白色絨毛狀。顯微觀