蛹蟲草液體發(fā)酵和人工子實(shí)體培養(yǎng)研究.pdf

1、蛹蟲草Cordyceps militaris(L.)Fr，又名北蟲草，是一種具有滋補(bǔ)作用的藥食兩用真菌，具有很高的藥用價(jià)值和營養(yǎng)價(jià)值。蛹蟲草是冬蟲夏草的近緣種，也是蟲草屬的模式種，我國北方民間把蛹蟲草當(dāng)做冬蟲夏草應(yīng)用。蛹蟲草作為冬蟲夏草的代替品，已引起人們的高度重視?，F(xiàn)代研究表明，蟲草素作為冬蟲夏草的重要活性成分，具有抗腫瘤、抗病毒、抗疲勞、抗菌、抗氧化，提高人體免疫等顯著功效，而蛹蟲草的活性成分如蟲草素、蟲草多糖、超氧化物歧化酶、腺苷

2、等含量明顯高于天然蟲草，被認(rèn)為是冬蟲夏草的理想代替品。
　　本研究主要以蟲草素為指標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。利用蟲草素的高效液相色譜(HPLC)定量分析手段以及優(yōu)化好的超聲提取條件，對(duì)不出草蛹蟲草固體培養(yǎng)基中的蟲草含量進(jìn)行測定，為合理利用廢棄固體培養(yǎng)基提供依據(jù)。其次，對(duì)維生素B1、B6、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)等微量添加物對(duì)蛹蟲草液體發(fā)酵液中蟲草素產(chǎn)量的影響進(jìn)行研究。第三，進(jìn)行蛹蟲草固體培養(yǎng)出草實(shí)驗(yàn)，對(duì)影響人工蛹蟲草出草的培

3、養(yǎng)基組成、生長激素、保濕劑、培養(yǎng)條件的等因素進(jìn)行了研究。主要結(jié)果如下:
　　1、建立了蟲草素HPLC快速檢測方法。該方法不僅能使蟲草素色譜峰與其它色譜峰得到很好的分離，而且能快速、簡便地對(duì)蟲草素的含量進(jìn)行定性、定量分析。該方法對(duì)以蟲草素為指標(biāo)的蛹蟲草液體深層發(fā)酵、蛹蟲草固體培養(yǎng)等研究具有很好的借鑒價(jià)值。對(duì)不出草蛹蟲草固體培養(yǎng)基中蟲草素的含量測定結(jié)果表明，5個(gè)批次不出草的蛹蟲草固體培養(yǎng)基均含有較高含量的蟲草素，其平均含量高達(dá)548.

4、5μg/g，具有較高的利用價(jià)值。
　　2、在設(shè)置的幾個(gè)微量元素添加梯度中維生素B1、B6、2，4-D均能提高蟲草的產(chǎn)量，其中維生素B1和B6的最佳添加量都為0.83 g/L，2，4-D的最佳添加量為15 mg/L。本實(shí)驗(yàn)還考察了高溫滅菌對(duì)維生素B1、B6和2，4-D對(duì)蛹蟲草發(fā)酵液中蟲草素產(chǎn)量的影響。結(jié)果表明，高溫滅菌可使部分維生素B1分解，高溫滅菌前添加維生素B1比滅菌后添加更有利于蟲草素產(chǎn)量的增加，蟲草素的產(chǎn)量提高了19.9％。

5、
　　3、對(duì)影響蛹蟲草固體培養(yǎng)出草的條件進(jìn)行優(yōu)化。在固料選擇的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，從接種到完成轉(zhuǎn)色，以大米小麥1∶1為固料的培養(yǎng)基中蟲草素的含量最高，達(dá)318.6μg/g，由于固體培養(yǎng)基中蟲草素的含量與子實(shí)體中蟲草素的含量具有正相關(guān)性，因此選擇大米小麥1∶1作為基礎(chǔ)固料進(jìn)行蛹蟲草出草實(shí)驗(yàn)。在2，4-D的添加實(shí)驗(yàn)中，結(jié)果表明，添加6 mg/L的2，4-D最適于蛹蟲草子實(shí)體的生長，并獲得最大產(chǎn)量5.8±0.3 g/瓶，而添加過多的2，4-D