巨噬細(xì)胞內(nèi)巴爾通體存活及其誘導(dǎo)炎性反應(yīng)的研究.pdf

1、巴爾通體(Bartonella)是一類(lèi)由節(jié)肢動(dòng)物傳播,兼性細(xì)胞內(nèi)寄生的需氧小桿菌,革蘭氏染色陰性、氧化酶陰性、培養(yǎng)條件需求苛刻,能持續(xù)感染動(dòng)物宿主的血管內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞等。巴爾通氏體原歸為立克次氏體目,現(xiàn)劃分為α-變形菌綱(Proteobacteria),根瘤菌目(Rhizobiales),巴爾通體科(Bartonellaceae),巴爾通氏體屬(Bartonella)。隨著分子生物學(xué)分類(lèi)方法的應(yīng)用,目前已有24個(gè)種及3個(gè)亞種歸為巴爾

2、通體屬,14種被確認(rèn)與人類(lèi)感染密切相關(guān)。人源巴爾通體感染常導(dǎo)致人類(lèi)罹患貓抓病及桿菌樣血管瘤等,組織病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)內(nèi)存在大量巴爾通體,提示巴爾通體具有能夠逃避宿主先天免疫吞噬的功能,但目前關(guān)于巴爾通體與巨噬細(xì)胞間相互作用的研究尚未深入開(kāi)展。
　　本研究利用鼠源巴爾通體(Bartonella tribocorum)體外感染J774A1、RAW264.7及SD大鼠腹腔巨噬細(xì)胞,初步探索巴爾通體在巨噬細(xì)胞內(nèi)存活特性以及感染刺激巨噬細(xì)

3、胞分泌細(xì)胞因子變化影響。
　　一、不同巨噬細(xì)胞內(nèi)巴爾通體存活特性
　　首先,用Dylight405結(jié)合的羊抗兔IgG二抗、Dylight488結(jié)合的羊抗兔IgG二抗分別標(biāo)記巨噬細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的巴爾通體,通過(guò)免疫熒光方法檢測(cè)巴爾通體感染J774A1和腹腔巨噬細(xì)胞的情況。熒光顯微觀察證實(shí)巨噬細(xì)胞能有效吞噬巴爾通體,細(xì)胞形態(tài)未發(fā)生顯著變化。
　　其次,通過(guò)巴爾通體感染J774A1、RAW264.7及腹腔巨噬細(xì)胞的慶大霉素保護(hù)

4、實(shí)驗(yàn),在不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)巴爾通體在巨噬細(xì)胞內(nèi)的存活情況。實(shí)驗(yàn)證實(shí)被吞噬的巴爾通體在不同巨噬細(xì)胞內(nèi)均能增殖及存活至48小時(shí),并且能在LPS誘導(dǎo)活化的巨噬細(xì)胞中持續(xù)存活,提示胞內(nèi)感染的巴爾通體具有一定逃避巨噬細(xì)胞殺菌活性的特性。
　　二、巴爾通體感染巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子特性
　　通過(guò)熒光定量PCR的方法檢測(cè)鼠腹腔巨噬細(xì)胞與巴爾通體相互作用后,細(xì)胞因子的變化情況。研究表明,巨噬細(xì)胞與巴爾通體作用2-12h之間IL-10持續(xù)升高,IL