miR-21對人膠質(zhì)瘤細胞株SHG-44放射敏感性影響及其影響機制研究.pdf

1、目的：觀察miR-21在人腦膠質(zhì)瘤細胞SHG-44及其輻射抗性模型中的表達差異，探討敲低miR-21表達聯(lián)合輻射對SHG-44輻射敏感性的影響，為以miR-21為靶點的分子靶向放療增敏提供體外研究的理論及實驗依據(jù)。
　　 方法：使用膠質(zhì)瘤細胞株SHG-44，建立輻射抗性膠質(zhì)瘤模型SHG-44抗，分別給予6 MV X射線單次照射0、1、2、4、6、8 Gy，多靶單擊模型擬合細胞存活曲線，評估所構(gòu)建模型的輻射抗性效果。使用Taqma

2、n探針實時熒光定量PCR法檢測SHG-44及SHG-44抗細胞株中miR-21表達，Western Blot法檢測信號轉(zhuǎn)導子和轉(zhuǎn)錄激活子3蛋白表達（stat3）。使用脂質(zhì)體介導采用瞬間轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染反義miR-21寡核苷酸（AS-miR-21）及陰性對照寡核苷酸于膠質(zhì)瘤SHG-44細胞中。設(shè)空白對照組、陰性對照轉(zhuǎn)染組及AS-miR-21轉(zhuǎn)染組，成克隆實驗計算放射增敏比（SER），繪制細胞存活曲線。流式細胞儀檢測上述3組及聯(lián)合單次6 Gy照射

3、后細胞凋亡率、細胞周期變化。吖啶橙/溴乙啶染色法，在激光共聚焦顯微鏡下觀察輻射聯(lián)合組SHG-44細胞凋亡的形態(tài)學特征。
　　 結(jié)果：成功建立了SHG-44抗輻射抗性細胞株，集落形成實驗顯示SHG-44細胞D0=2.35、SF2=0.62，SHG-44抗細胞D0=3.22，SF2=0.74，兩組SF2比較差異有統(tǒng)計學意義（t=4.13，P<0.05）。qRT-PCR及Western blot法檢測SHG-44抗細胞的miR-21表

4、達及stat3蛋白表達均較SHG-44升高。SHG-44細胞轉(zhuǎn)染AS-miR-21組的D0、Dq及SF2值較空白對照組及陰性轉(zhuǎn)染組降低，放射增敏比SERD0、SERDq分別為1.32、2.10。細胞周期分析示轉(zhuǎn)染組較空白對照及陰性對照組的G0+G1期比例增高，S期比例降低且差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。凋亡分析示照射組、miR-21轉(zhuǎn)染組及聯(lián)合組的早期凋亡率均高于對照組（P<0.05）。AO/EB染色可見聯(lián)合組凋亡細胞核固縮、核