miR-223調(diào)節(jié)ATM基因表達(dá)影響人腦膠質(zhì)瘤U87MG細(xì)胞放射敏感性的研究.pdf

1、乂 n .人學(xué) 碩 . I:研 究 少 畢 、 丨 k論 文m iR-223 調(diào)節(jié) ATM 基 因表達(dá) 影 響人腦 膠 質(zhì)瘤U87MG 細(xì) 胞放 射 敏 感 性 的研 究院 系 ： 復(fù) 旦 大 學(xué) 附 屬 腫 瘤 醫(yī) 院專(zhuān) 業(yè) ： 腫 瘤 學(xué)碩 士 生 姓 名 ：梁 麗 萍學(xué) 號(hào) ： 092 1 12 30026導(dǎo) 師 ： 章 真 教 授導(dǎo) 師 組 成 員 ： 吳 興 中 教 授馬 學(xué) 軍 副 教 授朱 驥 副 教 授俞 曉 立

2、 副 教 授復(fù) U 人學(xué) 碩 I:研 究 卞 畢 、 I k 論 文m iR-223 調(diào)節(jié) ATM 基 因表 達(dá) 對(duì) 人腦 膠 質(zhì)瘤 U87MG 細(xì) 胞 放射 敏感 性 影 響 的研 宄中文 摘 要背 景 和 目的 : m icroRNA-223 (m iR-223 ) 可 以促 進(jìn) 粒 細(xì) 胞 的分 化 和 成 熟 ，可 抑 制S ta thm in l 的 表 達(dá) 對(duì) 肝 癌 發(fā) 生 起 負(fù) 性 調(diào) 控 作 用 ， m iR- 22

3、3 也 可 以通 過(guò) 調(diào) 控 抑 癌 基因 EPB4 1L3 的表 達(dá) 促 進(jìn) 胃癌 的 轉(zhuǎn) 移 和 侵 襲 。為進(jìn) 一 步 探 討 m iR- 223 的 功 能 ， 本 實(shí)驗(yàn) 室 通 過(guò) 生 物 信 息 學(xué) 預(yù) 測(cè) 發(fā) 現(xiàn) 許 多 m iR-223 的潛 在 靶 基 因 ， 猜 測(cè) m iR-223 可 能 通過(guò) 調(diào) 控 這 些基 因 的表 達(dá) 而 影 響 腫 瘤 細(xì) 胞 的生 長(zhǎng) 、增 殖 、侵 襲 轉(zhuǎn) 移 等 ，并 在 前 期

4、研宄 中證 實(shí) m iR223 確 實(shí) 下調(diào) IG F- 1R 的表 達(dá) 進(jìn) 而 抑 制 細(xì) 胞 的增 殖 ，但 是 m iR- 223對(duì) 腫 瘤 細(xì) 胞 輻 射 敏 感 性 的作 用 還 不 清 楚 。ATM 作 為 DNA 雙 鏈 斷 裂 后 促 進(jìn) DNA 同源重 組 修 復(fù) 的重 要 調(diào) 控 因子 ，在 DNA 損 傷 修 復(fù) 中發(fā) 揮 重 要 作 用 。本 研 究 的 目的是 探討 m iR-22 3 對(duì) ATM 的 調(diào) 控

5、作 用 及 m iR-223 對(duì) 腫 瘤 細(xì) 胞 放 射 敏 感 性 的影 響 ， 為 改 善腫 瘤 細(xì) 胞 的放 射 治 療 效 果 提 供 新 思 路 。材 料 和 方 法 : PCR 擴(kuò) 增 包 含 m iR-223 結(jié) 合 位 點(diǎn) 的 ATM 3 ’U TR 片 段 ，將 其 克 隆 到p s i-CH EC K 載 體 中 ，構(gòu) 建 ps i-CHECK_A TM3 ’UTR 質(zhì) 粒 ；PCR 擴(kuò) 增 t niR- 223 片

6、段 ，將 其 克 隆 到 慢 病 毒 載 體 PLL3.7 中 ， 將 ps i-a iECK-ATM3 ’UTR 質(zhì) 粒 與PLL3.7-m iR-223 質(zhì) 粒 共 轉(zhuǎn) 染 到 29 3T 細(xì) 胞 ，利 用 雙 熒 光 素 酶 報(bào) 告 基 因 方 法 驗(yàn) 證m iR-223 對(duì) ATM 的調(diào) 控 作 用 ；包 裝 P LL3.7_m iR_223 慢 病 毒 ，感 染 人 腦 膠 質(zhì) 瘤U87-MG 細(xì) 胞 ， 建 立 高 表 達(dá)

7、m iR-223 的穩(wěn) 定細(xì) 胞 株 ； Rea l-t im e PCR 檢 測(cè) m iR- 223 、ATM 的表 達(dá) 水 平 ，W estern B lotting 檢 測(cè) ATM 蛋 白的表 達(dá) ，給 予 細(xì) 胞 0 、 1、2 、4 、6 、8Gy X 線 射 線 照 射 后 ， 克 隆形 成 實(shí) 驗(yàn) 檢 測(cè) 細(xì) 胞 的放 射 敏 感 性 ，LQ 模 型擬 合細(xì) 胞 存 活 曲線 。結(jié) 果 : 雙 熒光 素 酶 報(bào) 告 基

8、因檢 測(cè) 顯 示 共 轉(zhuǎn) 染 m iR-223 和 ps i-CHECK-ATM 3 ’-UTR后 熒 光 活 性 下 降 明顯 ，差 別 具 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 意 義 （ p= 0.0 1 ), 并 且 m iR-223 的抑 制 劑可 以逆 轉(zhuǎn) 熒 光 活 性 的 下 降 ，m iR- 22 3 可 以與 ATM 3 ’UT R 結(jié) 合 調(diào) 控 ATM 。RT-P CR 和r ea l-t im e PCR 證 實(shí) m iR-22 3

9、 在 U87-MG 中過(guò) 表 達(dá) 成 功 ； Rea l- tim e PCR 檢 測(cè)m iR~223 過(guò) 表 達(dá) 后 ATM mRNA 表 達(dá) 沒(méi) 有 明顯 變 化 ，而 Western B lotting 結(jié) 果 顯 示ATM 蛋 白水 平 明顯 降低 ?？?隆 形 成 實(shí) 驗(yàn) 檢 測(cè) U87-223 和 U8 7-EV 細(xì) 胞 的放 射 敏 感性 ， 經(jīng) LQ 模 型 擬 合 后 得 出 U8 7-223 細(xì) 胞 存 活 曲 線