皮膚癬菌體外藥物敏感試驗(yàn)及RAPD分型研究.pdf

1、目的：皮膚癬菌病是皮膚科的常見(jiàn)病、多發(fā)病，其病原真菌-皮膚癬菌的分類(lèi)鑒定以及療效不佳、復(fù)發(fā)率高一直是流行病學(xué)研究和防治工作中的難題。本課題對(duì)皮膚癬菌從臨床標(biāo)本的真菌學(xué)分析、抗真菌藥物敏感性方法以及分子生物學(xué)分類(lèi)鑒定等方面進(jìn)行研究，以期為皮膚癬菌的分離、培養(yǎng)、鑒定提供指導(dǎo)，為皮膚癬菌病的診斷、治療提供依據(jù)并為新藥評(píng)價(jià)提供可靠的手段。 方法：1、臨床標(biāo)本的真菌學(xué)分析：本試驗(yàn)包括18-70歲，病甲面積>25％腳趾甲癬病例120例，分別

2、來(lái)源于青島醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院等青島各醫(yī)院皮膚科，應(yīng)用KOH法鏡檢結(jié)合Mycosel和PDA鑒別選擇性培養(yǎng)基對(duì)病甲標(biāo)本進(jìn)行分離，然后應(yīng)用普通平板分離培養(yǎng)法和小培養(yǎng)法對(duì)分離出的皮膚癬菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定。2、皮膚癬菌抗真菌藥物敏感性研究：按美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(NCCLS)2003年版產(chǎn)孢豐富絲狀真菌的液基稀釋抗真菌藥敏試驗(yàn)參考方案(M38-A)測(cè)定藥物對(duì)所分離的三種皮膚癬菌的最低抑菌濃度(MIC)。3、皮膚癬菌的分子生物學(xué)分類(lèi)鑒定：運(yùn)用隨

3、機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA分析的方法，以單個(gè)引物(GACA)<,4>對(duì)我室分離培養(yǎng)得到的四種常見(jiàn)皮膚癬菌(紅色毛癬菌、須癬毛癬菌、絮狀表皮癬菌和石膏樣小孢子菌)的基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增。檢測(cè)聚合酶鏈反應(yīng)產(chǎn)物，并根據(jù)電泳后指紋圖譜的差異進(jìn)行種屬間鑒別。 結(jié)果：1、臨床標(biāo)本的真菌學(xué)分析：從120例甲癬患者的病甲上獲得的標(biāo)本共培養(yǎng)和檢測(cè)到4種皮膚癬菌，分別是紅色毛癬菌、須癬毛癬菌、絮狀表皮癬菌、石膏樣小孢子菌，這4種皮膚癬菌所占的比例分別為68

4、.3％、22.5％、7.5％、1.7％。2、皮膚癬菌抗真菌藥物敏感性研究：藥敏試驗(yàn)檢測(cè)出三種甲真菌的MIC值，結(jié)果顯示特比萘酚對(duì)三種皮膚癬菌都具有非常好的抑制作用；M38-A方案有較好的重復(fù)性和穩(wěn)定性，可作為一種較好的檢驗(yàn)方法在實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)用。3、皮膚癬菌的分子生物學(xué)分類(lèi)鑒定：運(yùn)用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA分析的方法可對(duì)四種常見(jiàn)的皮膚癬菌(紅色毛癬菌、須癬毛癬菌、絮狀表皮癬菌和石膏樣小孢子菌)的基因型進(jìn)行快速鑒別。 結(jié)論：1、臨床標(biāo)本的

5、真菌學(xué)分析：應(yīng)用KOH法鏡檢結(jié)合Mycosel和PDA鑒別選擇性培養(yǎng)基對(duì)標(biāo)本進(jìn)行分離，然后應(yīng)用普通平板分離培養(yǎng)法和小培養(yǎng)法可以完成對(duì)皮膚癬菌的分離培養(yǎng)、種屬鑒定。2、皮膚癬菌抗真菌藥物敏感性研究：應(yīng)用NCCLS的M38-A方案檢測(cè)特比萘芬對(duì)常見(jiàn)四種皮膚癬菌的抗真菌活性，結(jié)果理想，拓寬了該方案的應(yīng)用范圍，有望建立皮膚癬菌抗真菌藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化方案，更好地為臨床治療提供依據(jù)并為新藥評(píng)價(jià)提供可靠的手段。3、皮膚癬菌的分子生物學(xué)分類(lèi)鑒定：運(yùn)用隨機(jī)