皮膚癬菌體外藥物敏感試驗及RAPD分型研究.pdf

1、目的：皮膚癬菌病是皮膚科的常見病、多發(fā)病，其病原真菌-皮膚癬菌的分類鑒定以及療效不佳、復發(fā)率高一直是流行病學研究和防治工作中的難題。本課題對皮膚癬菌從臨床標本的真菌學分析、抗真菌藥物敏感性方法以及分子生物學分類鑒定等方面進行研究，以期為皮膚癬菌的分離、培養(yǎng)、鑒定提供指導，為皮膚癬菌病的診斷、治療提供依據(jù)并為新藥評價提供可靠的手段。 方法：1、臨床標本的真菌學分析：本試驗包括18-70歲，病甲面積>25％腳趾甲癬病例120例，分別

2、來源于青島醫(yī)學院附屬醫(yī)院等青島各醫(yī)院皮膚科，應用KOH法鏡檢結合Mycosel和PDA鑒別選擇性培養(yǎng)基對病甲標本進行分離，然后應用普通平板分離培養(yǎng)法和小培養(yǎng)法對分離出的皮膚癬菌進行形態(tài)學鑒定。2、皮膚癬菌抗真菌藥物敏感性研究：按美國國家臨床實驗室標準委員會(NCCLS)2003年版產孢豐富絲狀真菌的液基稀釋抗真菌藥敏試驗參考方案(M38-A)測定藥物對所分離的三種皮膚癬菌的最低抑菌濃度(MIC)。3、皮膚癬菌的分子生物學分類鑒定：運用隨

3、機擴增多態(tài)性DNA分析的方法，以單個引物(GACA)<,4>對我室分離培養(yǎng)得到的四種常見皮膚癬菌(紅色毛癬菌、須癬毛癬菌、絮狀表皮癬菌和石膏樣小孢子菌)的基因組DNA進行擴增。檢測聚合酶鏈反應產物，并根據(jù)電泳后指紋圖譜的差異進行種屬間鑒別。 結果：1、臨床標本的真菌學分析：從120例甲癬患者的病甲上獲得的標本共培養(yǎng)和檢測到4種皮膚癬菌，分別是紅色毛癬菌、須癬毛癬菌、絮狀表皮癬菌、石膏樣小孢子菌，這4種皮膚癬菌所占的比例分別為68

4、.3％、22.5％、7.5％、1.7％。2、皮膚癬菌抗真菌藥物敏感性研究：藥敏試驗檢測出三種甲真菌的MIC值，結果顯示特比萘酚對三種皮膚癬菌都具有非常好的抑制作用；M38-A方案有較好的重復性和穩(wěn)定性，可作為一種較好的檢驗方法在實驗室中應用。3、皮膚癬菌的分子生物學分類鑒定：運用隨機擴增多態(tài)性DNA分析的方法可對四種常見的皮膚癬菌(紅色毛癬菌、須癬毛癬菌、絮狀表皮癬菌和石膏樣小孢子菌)的基因型進行快速鑒別。 結論：1、臨床標本的

5、真菌學分析：應用KOH法鏡檢結合Mycosel和PDA鑒別選擇性培養(yǎng)基對標本進行分離，然后應用普通平板分離培養(yǎng)法和小培養(yǎng)法可以完成對皮膚癬菌的分離培養(yǎng)、種屬鑒定。2、皮膚癬菌抗真菌藥物敏感性研究：應用NCCLS的M38-A方案檢測特比萘芬對常見四種皮膚癬菌的抗真菌活性，結果理想，拓寬了該方案的應用范圍，有望建立皮膚癬菌抗真菌藥敏試驗標準化方案，更好地為臨床治療提供依據(jù)并為新藥評價提供可靠的手段。3、皮膚癬菌的分子生物學分類鑒定：運用隨機