抗皮膚癬菌卵黃抗體的制備及其生物活性研究.pdf

1、皮膚癬菌是一類侵犯人體角蛋白組織的絲狀真菌，能感染人體皮膚、指（趾）甲、和毛發(fā)等而引起皮膚癬菌病，還可以引起膿癬、膿腫和肉芽腫等皮膚深部感染。目前，皮膚癬菌病主要采用廣譜抗生素，激光進行治療。此外，還有一些從植物中提取的抑菌成分。然而，隨著真菌感染率的不斷升高，對現(xiàn)有抗真菌藥物的耐藥性日趨嚴重，并且治療周期長、見效慢、病情反復(fù)，給個人、家庭甚至社會都帶來沉重的負擔。因此，研發(fā)出安全、高效的抗菌制劑以解決市場需要變得尤為迫切。
　　

2、卵黃抗體（IgY）具有制備簡單、經(jīng)濟安全、穩(wěn)定性強等優(yōu)點，且特異性IgY有預(yù)防和治療疾病的功效。鑒于其擁有獨特的免疫化學(xué)性質(zhì)，近年來IgY在醫(yī)藥衛(wèi)生上有了廣泛的研究和應(yīng)用。因此，特異性IgY的研究可能為皮膚癬菌病的治療提供了一個新思路。然而，截止目前，據(jù)我們所知，有關(guān)抗皮膚癬菌的IgY研究報道很少。
　　本文主要研究了紅色毛癬菌（tr）和須癬毛癬菌（tm）兩種皮膚癬菌。分別提取了其胞漿蛋白（CP）和細胞壁蛋白（CWP），以提取的蛋

3、白作為抗原免疫產(chǎn)蛋母雞，經(jīng)PEG兩步沉淀法和飽和硫酸銨鹽析法提純特異性IgY。用考馬斯亮藍G-250法測定其蛋白含量；SDS-PAGE凝膠電泳分析測定IgY的純度以及相對分子質(zhì)量；ELISA檢測IgY的效價；Western blot和間接熒光抗體試驗分析特異性IgY的免疫反應(yīng)性；采用微量稀釋法研究IgY的體外抑菌活性，并建立皮膚癬菌感染的BALB/c小鼠模型評價IgY的療效。
　　結(jié)果表明：采用細胞裂解的方法提取的兩種皮膚癬菌的胞

4、漿蛋白種類較多；采用冷堿抽提的方法提取的細胞壁蛋白雜質(zhì)較少，條帶清晰。采用飽和硫酸銨溶液純化IgY，純度均達到90％以上。根據(jù)ELISA結(jié)果，IgY初免后約20天效價逐漸升高，38天左右IgY的效價達到了最高值（抗trCP IgY的效價最高達到1:32000，抗trCWP IgY的效價最高達到1:16000，抗tmCP的IgY效價最高達到1:16000，抗tmCWP的IgY效價最高達到1:32000）。最高效價持續(xù)時間為30-40天。免

5、疫印跡和間接熒光檢測結(jié)果顯示，IgY與對應(yīng)的皮膚癬菌蛋白發(fā)生特異性結(jié)合。體外抑菌實驗表明，隨著IgY濃度的增加，抗CWP的IgY能一定程度的抑制皮膚癬菌的生長，而抗CP的IgY對于皮膚癬菌的生長幾乎沒有影響。感染小鼠的皮損評分和組織病理學(xué)分析結(jié)果顯示，與陰性組對照，抗CWP的特異性IgY高劑量組（20 mg/mL）、中劑量組（10 mg/mL）和低劑量組（5 mg/mL）均不同程度的緩解皮膚癬的病癥，并隨著劑量的增加，療效增強。抑菌活性